[發(fā)明專利]磺胺類和四環(huán)素類抗生素的人工復(fù)合抗原、廣譜檢測(cè)抗體及其ELISA檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211459087.X
• 申請(qǐng)日: 2022-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN115772215A
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉旭東;張玉超;吳福勇;余梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 茅臺(tái)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;G01N21/31;G01N21/78;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/535
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 王立普

1.一種人工復(fù)合抗原，具有式I所示結(jié)構(gòu)：

式I中，“N-Protein-N”表示載體蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工復(fù)合抗原，其特征在于，所述載體蛋白為牛血清蛋白或卵清蛋白。

3.權(quán)利要求1或2所述的人工復(fù)合抗原的制備方法，包括以下步驟：

將磺胺、戊二醛、載體蛋白、醇溶劑和緩沖溶液混合，進(jìn)行第一偶聯(lián)反應(yīng)，得到具有式a所示結(jié)構(gòu)的化合物；

將所述具有式a所示結(jié)構(gòu)的化合物、四環(huán)素和戊二醛混合，進(jìn)行第二偶聯(lián)反應(yīng)，得到具有式I所示結(jié)構(gòu)的人工復(fù)合抗原。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述第一偶聯(lián)反應(yīng)的溫度為22～26℃，時(shí)間為4～5h；

所述第二偶聯(lián)反應(yīng)的溫度為22～26℃，時(shí)間為4～5h。

5.權(quán)利要求1或2所述的人工復(fù)合抗原或權(quán)利要求3或4所述制備方法制備得到的人工復(fù)合抗原在制備磺胺類和四環(huán)素類抗生素廣譜檢測(cè)抗體中的應(yīng)用。

6.一種磺胺類和四環(huán)素類抗生素廣譜檢測(cè)抗體，由權(quán)利要求1或2所述的人工復(fù)合抗原或權(quán)利要求3或4所述制備方法制備得到的人工復(fù)合抗原免疫宿主動(dòng)物得到。

7.一種檢測(cè)磺胺類和/或四環(huán)素類抗生素的試劑盒，包括包被抗原，封閉劑，權(quán)利要求6所述的磺胺類和四環(huán)素類抗生素廣譜檢測(cè)抗體，酶標(biāo)二抗，顯色劑，酶標(biāo)板；

所述包被抗原為權(quán)利要求1或2所述的人工復(fù)合抗原或權(quán)利要求3或4所述制備方法制備得到的人工復(fù)合抗原；

所述包被抗原結(jié)構(gòu)中的載體蛋白與制備磺胺類和四環(huán)素類抗生素廣譜檢測(cè)抗體所用人工復(fù)合抗原結(jié)構(gòu)中的載體蛋白不同。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述包被抗原結(jié)構(gòu)中的載體蛋白為卵清蛋白，制備磺胺類和四環(huán)素類抗生素廣譜檢測(cè)抗體所用人工復(fù)合抗原結(jié)構(gòu)中的載體蛋白為牛血清蛋白；

或者，所述包被抗原結(jié)構(gòu)中的載體蛋白為牛血清蛋白，制備磺胺類和四環(huán)素類抗生素廣譜檢測(cè)抗體所用人工復(fù)合抗原結(jié)構(gòu)中的載體蛋白為卵清蛋白。

9.一種磺胺類和四環(huán)素類抗生素總量的ELISA檢測(cè)方法，包括以下步驟：

將含有包被抗原的緩沖溶液加至酶標(biāo)板中，進(jìn)行第一孵育，得到包被有包被抗原的酶標(biāo)板；

將封閉劑加至所述包被有包被抗原的酶標(biāo)板中，進(jìn)行第二孵育，洗去未結(jié)合物，得到封閉酶標(biāo)板；

將待測(cè)液和磺胺類和四環(huán)素類抗生素廣譜檢測(cè)抗體加至所述封閉酶標(biāo)板中，進(jìn)行第三孵育，洗去未結(jié)合物，得到競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合后的酶標(biāo)板；

將酶標(biāo)二抗加至所述競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合后的酶標(biāo)板中，進(jìn)行第四孵育，洗去未結(jié)合物，之后加入顯色劑進(jìn)行顯色反應(yīng)，測(cè)定所得顯色反應(yīng)液在492nm處的吸光度值；

根據(jù)所述吸光度值計(jì)算抗生素對(duì)抗體的抑制率；

根據(jù)所述抑制率和標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得待測(cè)液中磺胺類抗生素和四環(huán)素類抗生素的總濃度；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線為磺胺類抗生素和四環(huán)素類抗生素總濃度的自然對(duì)數(shù)值與抑制率的線性關(guān)系曲線。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的ELISA檢測(cè)方法，其特征在于，所述磺胺類抗生素為磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶和磺胺噻唑中的一種或幾種；

所述四環(huán)素類抗生素為四環(huán)素、金霉素、土霉素和環(huán)霉素中的一種或幾種。