[發明專利]一種生乳中乳蛋白定量檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202211439356.6
• 申請日: 2022-11-17
• 公開（公告）號: CN115754114A
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發明（設計）人: 韓奕奕;豐東升;張維誼;馬穎清;蔣棟華;陳柔含;楊曉君;劉洋;王霞;朱春燕;鄧波;王敏;楊靜;周彬
• 申請（專利權）人: 上海市農產品質量安全中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 上海泰博知識產權代理有限公司 31451
• 代理人: 謝文凱

本發明涉及一種生乳中乳蛋白定量檢測試劑盒及其應用，所述試劑盒包括：碳酸氫銨、二硫蘇糖醇、碘代乙酰胺、牛胰蛋白酶、甲酸。本發明實現了同時測定生乳中乳鐵蛋白、α?乳白蛋白和β?乳球蛋白含量，方法操作簡單、快速、準確度和靈敏度高，可以做到批量測定，具有良好的實際應用前景。

技術領域

本發明屬于生乳檢測領域，特別涉及一種生乳中乳蛋白定量檢測試劑盒及其應用。

背景技術

乳鐵蛋白(lactoferrin,LF)是乳汁中一種重要的非血紅素鐵結合糖蛋白，其分子量為80kDa，主要由乳腺上皮細胞表達和分泌。LF是一種與鐵的轉運和存儲有關、能夠調節免疫功能等重要作用的蛋白。它在初乳中含量最高，成熟乳中含量明顯降低。LF能夠與鐵離子結合，具有參與鐵代謝、運輸鐵的功能。它能防止鐵離子刺激腸胃并促使鐵的吸收利用，從而維持人體內鐵離子的正常水平。同時LF具有廣譜抗菌、抗氧化、抗癌、調節免疫系統等強大生物功能，LF之所以被重視乃是因為它可以奪走細菌生長所需的鐵質而抑制細菌的生長，或破壞細菌細胞膜而具殺死細菌的效果，此外LF可提升免疫力，抑制病毒所引起的感染，如腸病毒中的輪狀細菌、腸細菌71型等等。

α-乳白蛋白(α-Lactoalbumin，α-La)廣泛存在于哺乳動物(牛、山羊、駱駝、馬、荷蘭豬、兔等)和人的乳汁中，是由乳腺腺泡上皮合成的特殊蛋白質，它是牛乳清中第二大豐富的蛋白質。牛乳中的α-La和人乳中的α-La相比，74％的氨基酸是相同的，6％的氨基酸極為相似。α-La具有調節產乳、細胞溶解活性、誘導細胞生長抑制和細胞凋亡等多種功能。α-La中含有較高的色氨酸含量，有助于緩解壓力，改善工作表現，并改善睡眠，改善抽象的視覺記憶。由于從牛奶分離出來的α-La在很多方面與人乳都非常相似，使得α-La在嬰兒配方食品、保健品和藥品等領域得到廣泛應用。

β-乳球蛋白(β-Lactoblobulin，β-Lg)含有162個氨基酸殘基，分子量約為18ku，在鮮乳中主要是以非共價鍵連接的兩個單體形成的二聚體形式存在，每個單體中的4個半胱氨酸殘基在鏈內形成2個二硫鍵，β-Lg約占乳蛋白的7～12％。在若干細胞及動物實驗研究中發現，認為β-乳球蛋白的水解物質或分子修飾物，具有降膽固醇與抗氧化等生理活性。天然的β-乳球蛋白易與脂溶性營養素如VA、VD、VK結合，所以β-Lg是在液態乳中強化維生素最理想的物質。

目前有關乳制品中乳鐵蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白活性物質的含量具體有多少還不清楚，相關的檢測方法也各有局限，也沒有國家統一的標準作為依據，未形成系統的檢測方法，缺乏相應的檢測手段，無法滿足乳制品中乳鐵蛋白等活性成分的檢測需求。

CN109507423A公開的一種基于適配體探針同時檢測α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳鐵蛋白含量的方法。核酸適配體探針法和生物芯片法主要是基于分子間的作用力，如靜電相互作用、氫鍵、疏水相互作用等作用力，并未直接測定目標蛋白含量。前者采用核苷酸識別特殊序列，受溫度影響較大，重復性差；后者采用抗原抗體結合識別并定量檢測，盡管檢測時間短，但由于抗體存在一定不穩定性，假陽性率高，且成本較高。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種生乳中乳蛋白定量檢測試劑盒及其應用，本發明直接基于目標蛋白特征肽段，建立了超高效液相色譜串聯質譜法可達到同時測定生牛乳中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳鐵蛋白的含量，具有抗干擾能力強，靈敏度高，重復性好等優點。

本發明的一種生乳的前處理試劑，所述試劑包括：提取劑、還原劑、烷基化試劑、酶試劑、終止劑；其中所述提取劑為碳酸氫銨；還原劑為二硫蘇糖醇；烷基化試劑為碘代乙酰胺；酶試劑為牛胰蛋白酶；終止劑為甲酸。

優選地，所述提取劑為80～120mmol/L碳酸氫銨溶液；還原劑為450～550mmol/L二硫蘇糖醇溶液；烷基化試劑為450～550mmol/L碘代乙酰胺溶液；酶試劑為80～120μg/mL牛胰蛋白酶溶液。

本發明的一種生乳中乳蛋白定量檢測試劑盒，所述試劑盒含所述試劑。