[發(fā)明專利]一種裝載靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌體、其制備方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211434928.1
• 申請日: 2022-11-16
• 公開（公告）號: CN115806987A
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏洪波;王天怡;姜海濤;那路新;夏熒辛
• 申請（專利權(quán)）人: 夏洪波
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N5/10;C12N15/867;A61K8/60;A61K8/99;A61K31/7105;A61K47/46;A61K8/02;A61K9/00;A61P17/00;A61Q19/00
• 代理公司: 北京智丞瀚方知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11810
• 代理人: 白月霞

本發(fā)明公開了一種裝載靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌體、其制備方法及應(yīng)用。所述外泌體包含靶向酪氨酸酶基因的siRNA或shRNA。該方法操作簡單易行，工藝穩(wěn)定，適用性好。所得外泌體中包載有大量靶向酪氨酸酶基因的siRNA或shRNA，可高效抑制酪氨酸激酶的合成，從而減少黑色素的形成，可以作為一種高效的藥物傳遞系統(tǒng)應(yīng)用醫(yī)療美容領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種裝載靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌體、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

人的皮膚顏色主要由基礎(chǔ)表皮層中色素黑色素的含量決定。黑色素的產(chǎn)生多與內(nèi)分泌失調(diào)、日光照射有關(guān)，黑色素細(xì)胞的多少主要取決于遺傳，另外，還與內(nèi)分泌激素及營養(yǎng)狀況有關(guān)，由黑色素導(dǎo)致的疾病如:雀斑、黃褐斑、黑變病等，成為美容界研究的課題。

酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)是涉及人和小鼠黑素體細(xì)胞中黑色素合成的主要酶，其活性與毛發(fā)和皮膚色素沉著、色素沉著過度、老年斑和皮膚著色不均有關(guān)。

日常生活中我們一般通過使用美白化妝品例如美白面膜、精華、乳液、面霜等產(chǎn)品改善皮膚暗沉、色斑等肌膚問題。美白化妝品是由基質(zhì)加上其它輔料如抗氧化劑、肪腐劑、香料、表面活性劑、美白成分、保濕劑、皮膚滲透劑等組成。但是，目前市售的美白化妝品經(jīng)常會出現(xiàn)美白效果不佳、產(chǎn)品穩(wěn)定性差(外觀和質(zhì)的變化)、產(chǎn)生副作用(用后皮膚變得更黑、生斑甚至加重)等問題。

小干擾RNA(siRNA)介導(dǎo)的基因沉默是用于研究哺乳動物細(xì)胞中基因功能的有力工具。基因沉默技術(shù)自問世以來，在各種疾病包括色素沉著等肌膚問題的治療中得到廣泛應(yīng)用。US8119791B2公開了一種化妝品組合物，其包含一種或多種siRNA低聚物，能有效地改善、減少和/或消除皮膚色素沉著過度或其它不想要的皮膚色素沉著。CN105854028A公開了一種抑制酪氨酸酶表達(dá)的雙鏈RNA寡核苷酸及其在抑制酪氨酸酶表達(dá)、預(yù)防形成和/或消除色素形成斑、老年斑、增亮和/或漂白褐色皮膚、使褐色皮膚顏色均勻中的用途。RNA藥物雖然具有它的優(yōu)越性性，但是RNA藥物必須在胞內(nèi)才能發(fā)揮作用。但RNA分子帶負(fù)電荷，并且對體內(nèi)廣泛存在的核酸酶敏感。因此，RNA藥物目前仍存在在胞內(nèi)不能釋放、引起體細(xì)胞炎癥反應(yīng)、使用慢病毒/逆轉(zhuǎn)錄病毒遞送易引起基因突變等問題。

干細(xì)胞外泌體可用于美白。從理論機(jī)制上講，干細(xì)胞外泌體能夠?qū)崿F(xiàn)抗皮膚老化的可能途徑有促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移和增殖、促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)活性和減少皮膚氧化應(yīng)激反應(yīng)。外泌體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的方式主要有兩種：一是直接作用，外泌體表面的蛋白分子或脂質(zhì)配體直接激活靶細(xì)胞表面的受體，產(chǎn)生信號復(fù)合體并激活胞內(nèi)信號通路；二是遞送作用，外泌體可以與靶細(xì)胞的質(zhì)膜融合或內(nèi)吞直接進(jìn)入細(xì)胞，將自身攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等活性分子帶到細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的功能及生物學(xué)行為。

人體的所有核細(xì)胞都會分泌外泌體，干細(xì)胞外泌體是干細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中釋放出來的，把細(xì)胞培養(yǎng)的上清液收集起來，通過高速離心的方式就能獲得外泌體。干細(xì)胞來源的外泌體，具有降低細(xì)胞凋亡、緩解炎癥、促進(jìn)血管新生成，抑制纖維化、提升組織再生修復(fù)潛力等生物學(xué)功能，干細(xì)胞外泌體與干細(xì)胞療法在體內(nèi)發(fā)揮的作用一致，所以它在很大程度上可以代替目前的干細(xì)胞治療，同時(shí)，還可以避免干細(xì)胞治療帶來的安全性、穩(wěn)定性、排異性問題，因此很多生物學(xué)家堅(jiān)信外泌體是繼干細(xì)胞技術(shù)之后又一個重要的再生醫(yī)學(xué)發(fā)展方向。但是外泌體成分復(fù)雜，發(fā)揮作用的有效成分和作用機(jī)制不明確，生產(chǎn)工藝不穩(wěn)定，極大的限制了外泌體在醫(yī)美領(lǐng)域的應(yīng)用。由于在皮膚屏障完整的情況下，直接涂抹外泌體很難穿過角質(zhì)層進(jìn)入皮膚，所以目前的外泌體使用方式一般為靜脈注射。但是靜脈注射的外泌體，大部分不能到達(dá)靶標(biāo)部位(皮膚)，使用劑量高，半衰期短，安全性差，生產(chǎn)質(zhì)控要求高，成本高。

因此，開發(fā)一種靶向TYR基因的siRNA或shRNA分子及遞送該siRNA或shRNA分子藥物的外泌體具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種裝載靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌體、其制備方法及應(yīng)用。