[發明專利]一種裝載靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌體、其制備方法及應用在審
| 申請號： | 202211434928.1 | 申請日： | 2022-11-16 |
| 公開（公告）號： | CN115806987A | 公開（公告）日： | 2023-03-17 |
| 發明（設計）人： | 夏洪波;王天怡;姜海濤;那路新;夏熒辛 | 申請（專利權）人： | 夏洪波 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N5/10;C12N15/867;A61K8/60;A61K8/99;A61K31/7105;A61K47/46;A61K8/02;A61K9/00;A61P17/00;A61Q19/00 |
| 代理公司： | 北京智丞瀚方知識產權代理有限公司 11810 | 代理人： | 白月霞 |
| 地址： | 100020 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 裝載 靶向 酪氨酸 基因 核酸 分子 外泌體 制備 方法 應用 | ||
1.一種裝載靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌體，其特征在于，所述靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子選自siRNA、shRNA、反義寡核苷酸藥物、三鏈核酸、CpG寡核苷酸、Aptamer、microRNA中的一種或多種；
優選地，所述靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子是siRNA或shRNA。
2.根據權利要求1所述的外泌體，其特征在于，所述外泌體包含靶向酪氨酸酶基因的siRNA，所述靶向酪氨酸酶基因的siRNA的序列如SEQ NO:1-SEQNO:6所示；
優選地，所述靶向酪氨酸酶基因的siRNA的序列如SEQ NO:4、SEQ NO:5所示。
3.根據權利要求1所述的外泌體，其特征在于，所述外泌體包含靶向酪氨酸酶基因的shRNA，所述靶向酪氨酸酶基因的shRNA的序列如SEQ NO:7-SEQ NO:12所示。
4.權利要求1所述的外泌體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)設計合成可以有效沉默酪氨酸酶基因的siRNA，并感染細胞驗證其效果；
(2)根據步驟(1)中的siRNA序列設計shRNA序列；
(3)將步驟(2)中得到的shRNA序列克隆至質粒表達載體，得到shRNA表達載體；
(4)將步驟(3)中得到的shRNA表達載體用慢病毒進行包裝，得到shRNA慢病毒表達載體；
(5)用步驟(4)中得到的shRNA慢病毒表達載體感染間充質干細胞，收集陽性細胞培養液；
(6)從步驟(5)得到的陽性細胞培養液中提取外泌體。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述質粒表達載體為pLKO.1-puro質粒。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述間充質干細胞選自以下其中一種：脂肪來源間充質干細胞、臍帶來源的間充質干細胞、骨髓來源間充質干細胞、牙髓來源間充質干細胞、誘導多能干細胞衍生的間充質干細胞。
7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(6)中采用總外泌體分離試劑提取外泌體。
8.權利要求1-3任一項所述的外泌體或權利要求4-7任一項所述的制備方法制得的外泌體在制備用于抑制黑色素生成的藥物、化妝品或水光針中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，通過所述水光針將所述外泌體導入表皮深層和真皮層。
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