[發明專利]一種濕證動物模型的制備方法

在審

• 申請號: 202211434087.4
• 申請日: 2022-11-16
• 公開（公告）號: CN115813600A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 王劍;郭殷銳;邱靈燕
• 申請（專利權）人: 廣州中醫藥大學（廣州中醫藥研究院）
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00;A01K67/02;C12N1/20;C12N1/16;C12N1/02;C12R1/19;C12R1/725;C12R1/225;C12R1/645
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 陸國宇

1.一種濕證動物模型的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)在培養基中培養微生物，離心得到菌體，重懸得到菌體懸液備用；

(2)準備健康實驗動物，腹腔注射菌體懸液；

(3)檢測實驗動物的活動度、大便黏膩程度以及血液中的免疫炎癥因子的水平，判斷濕證模型是否建立成功。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的微生物為致病或條件致病微生物。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的微生物為真菌時，培養基為YM培養基；

步驟(1)中所述的微生物為細菌時，培養基為LB培養基。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的微生物包括白色念珠菌、大腸桿菌或K.pintolopesii中的至少一種。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的培養的條件為35～39℃培養20～30h；

步驟(1)中所述的離心為3000～7000r/min離心5～15min；；

步驟(1)中所述的重懸為使用無菌PBS重懸。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

步驟(2)中所述的實驗動物為C57BJ/6小鼠、KM小鼠和SD大鼠中的至少一種；

步驟(2)中所述的實驗動物分為實驗組和對照組。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

步驟(2)中所述的腹腔注射為根據實驗動物的體重，按0.8～3×10⁶CFU/g的菌體量進行注射。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：

步驟(3)中所述的免疫炎癥因子包括IL-17A和TNF-α中的至少一種；

步驟(3)中所述的大便黏膩程度的測定方法具體包括如下步驟：

將相同質量的糞便放于濾紙上，再加一層濾紙，濾紙上放50克砝碼，2分鐘后撤去法碼，觀察上層濾紙上粘有糞便痕跡的面積，測量直徑，以直徑值大小代表糞便黏濕度。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：

步驟(3)中所述的判斷濕證模型的方法具體包括如下步驟：

當實驗組中的動物相較對照組中活動度下降，大便黏膩程度測試的直徑超過對照組的50％以上，且動物血液中免疫炎癥因子較正常組升高50％以上時，則證明濕證模型建立成功。

10.權利要求1～9任一所述的濕證動物模型的制備方法在濕證的評價和分析中的應用。