[發明專利]一種濕證動物模型的制備方法

在審

• 申請號: 202211434087.4
• 申請日: 2022-11-16
• 公開（公告）號: CN115813600A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 王劍;郭殷銳;邱靈燕
• 申請（專利權）人: 廣州中醫藥大學（廣州中醫藥研究院）
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00;A01K67/02;C12N1/20;C12N1/16;C12N1/02;C12R1/19;C12R1/725;C12R1/225;C12R1/645
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 陸國宇

本發明提供了一種濕證動物模型的制備方法。本發明所述濕證動物模型的建立方法包括采用白色念珠菌、大腸桿菌等致病微生物進行腹腔注射的方法建立濕證動物模型。采用上述方法制作的濕證動物模型，在6～12小時內即可出現濕證的典型癥候即大便黏膩，四肢懈怠，造模成功率100％。采用上述方法制作的濕證動物模型的表現與臨床上濕證表現極其相似，該動物模型簡單有效，制備時間短，可重復性強，且可有效表征濕證的癥狀。采用上述方法制作的濕證動物模型可用于濕證的機理及其干預治療的研究。對進一步深入探討相關中醫病證的機理及其干預治療研究創造條件。

技術領域

本發明屬于動物模型技術領域，具體涉及一種濕證動物模型的建立方法。

背景技術

濕證是中醫病證名，中醫認為濕生百病。因濕性重著、粘滯、易阻礙氣機，損傷陽氣，故其病變常纏綿留著，不易速去。其癥候特點為頭脹而痛，脘腹滿悶，身重而痛，體倦，舌苔黏膩，脈緩或濡。濕證可分為內濕和外濕，內濕主要因攝食太多肥甘生濕食物，超過脾運化的負荷；外濕主要來源于感受外界環境中的濕邪。內濕和外濕可相互影響，說明內外濕有共同的發病機制。按現代研究，無論內濕外濕，均離不開致病微生物。內濕產生，是因為肥甘生濕食物滋助了腸道內致病微生物的定植、繁殖。外濕的產生，是因為空氣或水源中致病微生物侵襲人體呼吸道、消化道粘膜。

濕證牽涉到幾乎所有的疾病的發生發展，中醫對濕證有較詳細的癥候描述和中醫傳統術語機制分析，創造了許多治療濕證的方藥，但仍未能清晰闡述濕證特定的病理生理機制，未能獲得現代醫學的承認。一個重要的原因是還沒有一種便捷模擬濕證的癥候表現的模型動物，制約了對濕證的病理機制的深入理解，和評價濕證相關新藥或干預措施的效果及機制。

目前使用最多的濕證小鼠模型造模，以人工候箱加高脂飼料，維持濕度在95％以上，持續20天以上。但因為小鼠個體差異大，有些小鼠并不成模，或離開高濕環境，在數日內恢復正常。有研究在高濕環境和高脂飼料基礎上，增加了灌服一定含量的酒或乙醇，前10d予以大鼠高脂飼料，并隔日灌服白酒(10mL/kg),再將大鼠放置于模擬高溫高濕環境的人工氣候箱中。有研究在高濕環境和高脂飼料基礎上，增加了灌大腸桿菌或沙門氏菌。給予大鼠高脂高糖養10d,再放入高溫、高濕環境中,于96、120h后灌胃鼠傷寒沙門氏菌,然后移出至自然環境。結果主要癥狀及體征、發病條件等均近似于中醫濕熱證型。上述濕證制備方法的繁瑣，且條件不統一，制約了濕證機理的研究、濕證動物模型的推廣。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的主要目的在于提供一種濕證動物模型的制備方法。

本發明是通過以下技術方案來實現的：

一種濕證動物模型的制備方法，包括如下步驟：

(1)在培養基中培養微生物，離心得到菌體，重懸得到菌體懸液備用；

(2)準備健康實驗動物，腹腔注射菌體懸液；

(3)檢測實驗動物的活動度、大便黏膩程度以及血液中的免疫炎癥因子的水平，判斷濕證模型是否建立成功。

步驟(1)中所述的微生物為致病或條件致病微生物；優選為包括白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Esherichia coli)或K.pintolopesii中的至少一種；更優選為白色念珠菌。

當步驟(1)中所述的微生物為真菌時，培養基為YM培養基，當所述微生物為細菌時，培養基為LB培養基。

步驟(1)中所述的培養的條件為35～39℃培養20～30h；優選為37℃培養24h。

步驟(1)中所述的離心為3000～7000r/min離心5～15min；優選為6000r/min離心10min。

步驟(1)中所述的重懸為使用無菌PBS重懸。