[發明專利]一種下垂辣椒離體再生體系的構建方法

有效

• 申請號: 202211390003.1
• 申請日: 2022-11-08
• 公開（公告）號: CN115486372B
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發明（設計）人: 汪志偉;舒黃英;葛平飛;郝園園;成善漢;朱國鵬
• 申請（專利權）人: 海南大學三亞南繁研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 海南盛億專利代理事務所(普通合伙) 46005
• 代理人: 吳燕梅

本發明公開了一種下垂辣椒離體再生體系的構建方法，屬于植物組織培養技術領域。所示構建方法包括無菌苗的獲取、誘導培養、繼代培養、生根培養和煉苗移栽。本發明建立了經過無菌苗帶柄子葉誘導獲得下垂辣椒的高效再生體系，提高下垂辣椒再生率。本發明基于器官發生途徑，以下垂辣椒帶柄子葉為外植體，添加植物激素6?BA與IAA，簡化了下垂辣椒離體再生體系的構建，建立了穩定、高效的再生體系，為下垂辣椒的功能基因組研究和分子輔助育種提供了技術支持。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種下垂辣椒離體再生體系的構建方法。

背景技術

辣椒（Capsicumspp.）為茄科辣椒屬一年生或多年生植物，起源于中南美洲地區，是世界上最早馴化的蔬菜作物之一。由于辣椒兼具蔬菜和調味品的功能，世界范圍內具有極高的經濟價值。辣椒具有食用、觀賞以及醫藥等功能，有極高的經濟與研究價值。目前辣椒屬中已鑒定出35個種，其中包括5個辣椒栽培種，分別為：一年生辣椒（C. aunuum L.）、中國辣椒（C. chinense Jacq.）、灌木狀辣椒（C. frutescens L.）、下垂辣椒（C. baccatumL.）和柔毛辣椒（C. pubesens Ruiz＆Pavon）。下垂辣椒產地在南美洲，花單生，且花冠具有黃色或綠色斑點，與其他辣椒栽培種之間存在明顯的形態學差異與遺傳差異，并存在生殖隔離。

離體再生研究是植物生物技術和植物生物學基礎研究的關鍵，以植物部分器官為外植體的離體再生途徑有兩種：體細胞胚發生途徑和器官發生途徑。體細胞胚發生途徑經歷胚性愈傷組織、早期原胚、球形胚、心形胚和魚雷胚等階段形成成熟子葉胚，最終生長成完整植株；器官發生途徑在外植體產生愈傷組織時直接出現不定芽的芽原基，接著發育成不定芽、誘導不定根，最終生長出完整植株。一般器官發生途徑形成完整植株的時間短于體細胞胚發生途徑。

相對于茄科其他物種，辣椒離體再生體系構建發展較慢，嚴重的限制了辣椒功能基因研究和發展。辣椒再生體系主要集中在一年生辣椒（C. annuum）和中國辣椒（C. chinense）中的部分品種與品系。辣椒是組織培養頑拗性植物，同一個栽培種中的不同基因型（不同種質、品種）都存在顯著差異，不同栽培種之間參考性較弱，需要付出大量精力探索外植體類型、激素種類及濃度、再生途徑等，從而獲得各栽培種品種或種質理想的離體再生體系。有報道以下垂辣椒一個品種的葉片為外植體，添加2，4-D和Kn，通過體細胞胚發生途徑，離體再生出完整植株，本團隊利用同樣外植體和激素配方，實驗了多個下垂辣椒品種或種質，未離體再生出完整植株，提示下垂辣椒離體再生還需繼續探索。

發明內容

本發明針對目前下垂辣椒離體再生體系的不足，提供一種穩定、高效、誘導率高的下垂辣椒離體再生體系的構建方法。

本發明的目的通過以下技術方案來實現：一種下垂辣椒離體再生體系的構建方法，它包括以下步驟：

S1. 無菌苗的獲取：取下垂辣椒種子，用超純水浸泡后滅菌處理，用無菌濾紙吸干后接種到MS固體培養基上獲得無菌苗；

S2.誘導培養：將生長15～25d的無菌苗切取帶柄子葉作為外植體，接種到誘導培養基上培養20～25d，帶柄子葉兩端生成愈傷組織與不定芽；其中，所述誘導培養基為MS+3mg/L 6-BA +0.5mg/L IAA；

S3. 繼代培養：將步驟S2生成的愈傷組織與不定芽轉移至繼代培養基中培養15～20d，不定芽長至4～6cm；其中，所述繼代培養基與誘導培養基相同；

S4. 生根培養：將步驟S2或S3的不定芽切分下來接種到生根培養基中，培養2～3周長出5～8條根系；其中，所述生根培養基為MS＋0.2 mg/L IAA；