[發明專利]一種雙重主客體錨定表位印跡聚合物的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202211385628.9
• 申請日: 2022-11-07
• 公開（公告）號: CN115894930A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 賈瓊;許伊童;馬玖彤;鄭海嬌
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C08G77/26
• 分類號: C08G77/26;C08G77/06;C08J9/28;C08L83/08;B01J20/26;B01J20/30;B01D15/08;G01N21/65
• 代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797
• 代理人: 李斌

本發明適用于生命科學技術領域，提供了一種雙重主客體錨定表位印跡聚合物的制備方法及其應用，包括如下步驟：步驟（1）表位的選擇和修飾；步驟（2）Au納米星和Ag納米粒子的合成；步驟（3）基底材料的選擇及β－環糊精功能化；步驟（4）偶氮苯修飾的表位模板在基底材料上的錨定；步驟（5）定向表面印跡；步驟（6）偶氮苯修飾的表位模板的去除。本發明中的一種雙重主客體錨定表位印跡聚合物的制備方法，制備的雙重主客體錨定表位印跡聚合物與目標蛋白形成夾心復合物，以構建基于MIPs?SERS的檢測方法應用于小細胞肺癌患者的診斷，且具備所需樣本量小、線性范圍寬以及成本低，選擇性識別能力高，檢測方法靈敏度高等優勢。

技術領域

本發明屬于生命科學技術領域，尤其涉及一種雙重主客體錨定表位印跡聚合物的制備方法及其應用。

背景技術

近年來，蛋白質的分析方法主要有免疫分析、肽質量指紋圖分析、氨基酸序列分析和氨基酸組成分析等，質譜法是目前最廣泛使用的蛋白質鑒定方法，但是隨著醫療水平的提高，臨床診斷需要檢測限更低，靈敏度更高的檢測方法。表面增強拉曼散射（SERS）技術的靈敏度已經達到單分子水平，適用于痕量檢測并且具有檢測快速、分辨率高等特點。

目前比較普遍的蛋白質研究手段的主要基礎是抗原－抗體識別，抗體在生命科學領域中生物分子識別方面是人們普遍使用的生物試劑，但是抗體也存在很多缺點，制備過程復雜，價格高昂，一些抗體難以提純或很難制備，并且抗體不穩定，重復性差，因此發展抗體的替代物不僅具有重要的科學意義，而且具有巨大的經濟價值。

而分子印跡聚合物（MIPs）價格低廉，制備容易，對惡劣環境耐受力強，穩定性好，可重復使用，可以在復雜環境中選擇性識別目標物，但傳統分子印跡技術使用整個蛋白作為模板有很多缺點：可用的聚合體系在維持模板蛋白的天然構象方面受到限制，以及難以獲得大量高純度的模板蛋白，尤其是低豐度蛋白，相對較大的印跡位點易于與許多較小的非靶結合，導致選擇性降低，所有這些問題阻礙了蛋白質印跡材料的廣泛應用。

因此，針對以上現狀，迫切需要開發一種雙重主客體錨定表位印跡聚合物的制備方法及其應用，以克服當前實際應用中的不足。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明實施例的目的在于提供一種雙重主客體錨定表位印跡聚合物的制備方法及其應用，以解決上述背景技術中的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種雙重主客體錨定表位印跡聚合物的制備方法，包括如下步驟：

步驟（1）、選擇目標蛋白的C端和N端表位的氨基酸序列并對其進行修飾；

步驟（2）、Au納米星和Ag納米粒子的合成；

步驟（3）、基底材料的選擇及β－環糊精功能化；

步驟（4）、偶氮苯修飾的表位模板在基底材料上的錨定；

步驟（5）、定向表面印跡；

步驟（6）、偶氮苯修飾的表位模板的去除，得到分子印跡聚合物。

作為本發明進一步的技術方案，在步驟（1）中，對于目標蛋白C端的修飾，先引入賴氨酸，再利用賴氨酸上的氨基與4-（苯基偶氮）苯甲酸進行反應，得到偶氮苯修飾的C端表位；

對于目標蛋白N端的修飾，其末端存在可反應的氨基，直接與4-（苯基偶氮）苯甲酸反應，得到偶氮苯修飾N端表位。

作為本發明進一步的技術方案，在步驟（2）中，配置0.1molHEPES水溶液，通過滴加1molNaOH溶液將pH值調節至7.4，將超純水加入到2mLHEPES中，再加入40μL1%HAuCl₄，混合物在不攪拌的情況下反應1h，得到藍色AuNSs溶液；將含有0.0090g?AgNO₃的50?mL超純水加熱，沸騰后加入1?mL?1%檸檬酸三鈉溶液，煮沸1h后，將該溶液冷卻得到AgNPs。