[發明專利]一種跨膜蛋白176B重組載體和跨膜蛋白176B的分泌表達方法

在審

• 申請號: 202211384700.6
• 申請日: 2022-11-07
• 公開（公告）號: CN115786397A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 余樂;盛鑫龍;劉佩佩;程昊
• 申請（專利權）人: 優睿賽思（武漢）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12N15/66;C07K14/47
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.一種跨膜蛋白176B重組載體，其特征在于，所述跨膜蛋白176B重組載體包括表達載體和插入片段，所述插入片段包括按順序依次連接的編碼IgG信號肽的基因序列、編碼跨膜蛋白176B第142至第196氨基酸的基因序列和編碼mFC-6His蛋白標簽的基因序列；其中，所述跨膜蛋白176B第142至第196氨基酸的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.根據權利要求1所述的跨膜蛋白176B重組載體，其特征在于，編碼所述跨膜蛋白176B第142至第196氨基酸的基因序列如SEQ ID NO：5所示。

3.根據權利要求1所述的跨膜蛋白176B重組載體，其特征在于，所述IgG信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，編碼所述IgG信號肽的基因序列如SEQ ID NO：3所示。

4.根據權利要求1所述的跨膜蛋白176B重組載體，其特征在于，所述mFC-6His蛋白標簽的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示，編碼所述mFC-6His蛋白標簽的基因序列如SEQ ID NO：7所示。

5.根據權利要求1所述的跨膜蛋白176B重組載體，其特征在于，所述表達載體包括pCDNA3.4。

6.一種包含如權利要求1-5任一項所述的跨膜蛋白176B重組載體的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞包括HEK293F細胞。

7.一種跨膜蛋白176B的分泌表達方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、利用如權利要求1-5任一項所述的跨膜蛋白176B重組載體轉染宿主細胞；

S2、培養轉染后的宿主細胞，利用真核表達系統表達蛋白，收集培養上清液進行純化，得到分泌形式的跨膜蛋白176B。

8.根據權利要求7所述的跨膜蛋白176B的分泌表達方法，其特征在于，步驟S1中，構建所述跨膜蛋白176B重組載體包括：將編碼IgG信號肽的基因序列、編碼跨膜蛋白176B第142至第196氨基酸的基因序列和編碼mFC-6his蛋白標簽的基因序列連接到表達載體pCDNA3.4上，之后轉化到大腸桿菌DH5α感受態細胞，進行陽性克隆篩選，并經測序驗證，獲得所述跨膜蛋白176B重組載體。

9.根據權利要求7所述的跨膜蛋白176B的分泌表達方法，其特征在于，步驟S1中，采用瞬時轉染技術將所述跨膜蛋白176B重組載體轉染進宿主細胞，所述宿主細胞包括HEK293F細胞。

10.一種分泌蛋白，其特征在于，由權利要求8-9任一項所述的跨膜蛋白176B的分泌表達方法制備得到，所述分泌蛋白包括跨膜蛋白176B第142至第196氨基酸和mFC-6his蛋白標簽，所述mFC-6his蛋白標簽緊接在所述跨膜蛋白176B第142至第196氨基酸的C端。