[發明專利]一種檢測ApoE基因型的產品及方法

在審

• 申請號: 202211382462.5
• 申請日: 2022-11-07
• 公開（公告）號: CN115820828A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 潘偉;何震宇;趙自厚;尹明星;黃振輝
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: C12Q1/6881
• 分類號: C12Q1/6881;C12N15/11;C12Q1/6848
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 林德強

本發明公開了一種檢測ApoE基因型的產品及方法，該產品主要基于SEQ ID NO：1～4所示引物和HhaI限制性內切酶。通過使用SEQ ID NO：1～4所示引物對細胞樣本進行巢式PCR擴增，酶切處理后進行瓊脂糖凝膠電泳，即能有效分辨出ApoE基因型。該方法不需要依靠昂貴設備或者試劑，操作簡單，檢測效率高，成本低，并且僅需要通過電泳圖譜就能夠判斷基因型，檢測結果準確。而且取樣無創、方便，相比現有技術需要提取線粒體DNA或者人類基因組DNA的繁瑣操作，本發明能夠節省時間和經濟成本。

技術領域

本發明屬于基因分子檢測技術領域，具體涉及一種檢測ApoE基因型的產品及方法。

背景技術

載脂蛋白E(Apolipoprotein E，ApoE)是一種多態性蛋白，能參與脂蛋白的轉化與代謝過程。人ApoE是一個由299個氨基酸多肽肽鏈組成的血漿糖蛋白，分子量為34145D，，主要由肝臟合成，腦、腎、骨骼、腎上腺及巨噬細胞也可以合成，其作用主要用于轉運膽固醇、甘油三脂和磷脂。ApoE基因位于第19號染色體19q 13.2位置，基因全長3611bp，共有6個外顯子，mRNA長1180nt，編碼由317個氨基酸殘基組成的蛋白質。相關技術指出，ApoE基因多態性與老年相關性疾病、骨質疏松、阿爾茲海默病、心血管疾病、心肌梗死、高血脂癥、腎小球疾病等都有關聯。

由于ApoE基因多態性與臨床上多種疾病的發生及其發展有密切相關的聯系，所以在臨床上對ApoE基因多態性的檢測意義重大、前景廣闊。目前，國內外用于ApoE基因的兩個SNP位點(rs429358和rs7412)的分型方法有焦磷酸測序法、單鏈構象多態性(SSCP)技術、等位基因特異性多重PCR(multi-ARMS PCR)技術、熒光定量PCR(Real-Time PCR)技術、基因芯片技術、變性高效液相色譜分析、高分辨率熔解曲線分析(HRM)技術、基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜技術(MALDI-TOFMS)、全血直擴PCR技術，這些方法各有各的優點以及局限性。

但現有技術中尚未有能夠基于Hha I酶切實現ApoE基因多態性分型的方法。

發明內容

本發明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種檢測ApoE基因型的產品及方法。本發明中的檢測方法能夠在不進行核酸提取的情況下，直接以口腔上皮細胞為樣本進行檢測，且基于設計得到的酶切產物彼此之間的大小差距有效增大了檢測的分辨率，不需要聚丙烯酰胺凝膠電泳而僅通過瓊脂糖凝膠電泳就能實現分型。

本發明的第一個方面，提供用于ApoE基因型分型的引物，所述引物如SEQ ID NO：1～4所示。

在本發明的一些實施方式中，所述引物具體為：

引物FP1：5’-GGCCTACAAATCGGAACTGGA-3’(SEQ ID NO：1)；

引物RP1：5’-GGCTCGAACCAGCTCTTGAGG-3’(SEQ ID NO：2)；

引物FP2：5’-TGATAACAGGCCCGGCTGGACGCG-3’(SEQ ID NO：3)；

引物RP2：5’-CGCTCGACGCCCTCGCGGG-3’(SEQ ID NO：4)。

在本發明的一些實施方式中，所述引物FP1和引物RP1分別作為上下游引物配合使用，所述引物FP2和引物RP2分別作為上下游引物配合使用。

在本發明的一些實施方式中，基于所述引物FP1和引物RP1得到的PCR擴增片段大小為570～600bp。

在本發明的一些實施方式中，基于所述引物FP1和引物RP1得到的PCR擴增片段大小為585bp。

在本發明的一些實施方式中，基于所述引物FP2和引物RP2得到的PCR擴增片段大小為211～231bp。