[發(fā)明專利]利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶定量檢測RhD抗原的方法

在審

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• 申請日: 2022-11-03
• 公開（公告）號: CN115753652A
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高明;陳玉平;陳芳芳;徐丹;王布強;卞夢瑤;周蓉;卞國柱
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/01
• 代理公司: 江陰市揚子專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32309
• 代理人: 隋玲玲

1.一種利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶定量檢測RhD抗原的方法，其特征在于，所述方法包含：將待檢紅細胞添加至包被有抗D抗體的容器中進行離心，離心結(jié)束后，用生理鹽水洗滌，去除殘余液體，加入過氧化物酶底物，利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶顯色，加入酸性終止液終止反應(yīng)，將微孔板置于酶標(biāo)儀，在合適的光波下檢測吸光度值，即OD值；

若待檢紅細胞在包被有抗D抗體的容器檢測OD值均小于Cutoff值，則待檢紅細胞的RhD血型為陰性；

若待檢紅細胞在包被有抗D抗體的容器檢測OD值均大于Cutoff值，則待檢紅細胞的RhD血型為陽性。

2.如權(quán)利要求1所述的利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶定量檢測RhD抗原的方法，其特征在于，所述離心的轉(zhuǎn)速為90-360g、時間為1-30min；對離心后的微板用生理鹽水進行3-6次洗滌；在洗滌后的微孔板容器中加入過氧化物酶底物顯色3-20分鐘。

3.如權(quán)利要求1所述的利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶定量檢測RhD抗原的方法，其特征在于， Cutoff值=0.2。

4.如權(quán)利要求1所述的利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶定量檢測RhD抗原的方法，其特征在于，所述分型步驟前，還包含稀釋步驟；所述稀釋步驟為：將待分型紅細胞稀釋至體積濃度為0.1-1%；所述待檢紅細胞采用Liss或生理鹽水進行稀釋。

5.利用權(quán)利要求1-4任一項所述的利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶定量檢測RhD抗原的方法進行檢測的系統(tǒng)，其特征在于，所述系統(tǒng)包括包被有抗D抗體的容器。

6.如權(quán)利要求5所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述容器為微孔板。

7.一種權(quán)利要求5所述的系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

包被步驟：將緩沖液A稀釋的抗D抗體添加至容器中，于2-8℃包被8-16h，洗滌，得到經(jīng)包被的容器；所述緩沖液A為碳酸鹽緩沖液；

封閉步驟：在經(jīng)包被的容器中緩沖液B，于37℃封閉0.5-3h，洗滌，得到包被有抗D抗體的容器；所述緩沖液B為含有脫脂奶粉、蔗糖、和Tween20的PBS緩沖液。

8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，緩沖液B中所述脫脂奶粉的質(zhì)量濃度為0.1-3%、所述蔗糖在緩沖液中的質(zhì)量濃度為1-10%、所述Tween20在緩沖液中的體積濃度為0.01-0.5%。

9.如權(quán)利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，所述包被步驟中，先用pH 7.2-9.8的碳酸鹽緩沖液A將抗D抗體稀釋至16-2048倍，得到稀釋液，再將稀釋液添加至容器中；

所述洗滌步驟為：加入緩沖液C進行洗滌，重復(fù)洗滌1-5次；所述緩沖液C為含有Tween20的pH6.5-8.5的PBS緩沖液；所述Tween20在緩沖液中的體積濃度為0.01-0.5%。

10.權(quán)利要求1-4任一項所述的利用紅細胞內(nèi)源性過氧化物酶定量檢測RhD抗原的方法在檢測RhD血型抗原檢測中的應(yīng)用。