[發明專利]腫瘤細胞、內質網逐級靶向納米乳劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202211365452.0
• 申請日: 2022-10-31
• 公開（公告）號: CN115590817A
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 胡航;錢嘉豪;袁婷;徐德鋒
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: A61K9/107
• 分類號: A61K9/107;A61K41/00;A61K47/54;A61P35/00;A61P37/04;C08G65/332;C08G65/334;A61K33/00
• 代理公司: 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258
• 代理人: 李楠

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種腫瘤細胞、內質網逐級靶向納米乳劑及其制備方法。以聚乙二醇和2?十六烷基十八烷酸為原料，縮合制備聚乙二醇?2?十六烷基十八烷酸偶聯物，再將其和D?生物素縮合制備生物素修飾的聚乙二醇?2?十六烷基十八烷酸偶聯物；二氫卟吩e6和N?對甲苯磺酰基乙二胺縮合制備N?對甲苯磺酰基乙二胺?二氫卟吩e6偶聯物；經薄膜水化法制備載N?對甲苯磺酰基乙二胺?二氫卟吩e6偶聯物聚合物膠束，加入全氟辛烷，超聲乳化，通入氧氣，最終制得同時負載有N?對甲苯磺酰基乙二胺?二氫卟吩e6偶聯物和氧氣的納米乳劑。該納米乳劑具有酯酶響應性和腫瘤細胞、內質網逐級靶向性，能夠誘導內質網應激。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種腫瘤細胞、內質網逐級靶向納米乳劑及其制備方法。

背景技術

光動力治療自成功應用于臨床以來，引起廣泛關注。傳統的光動力治療包括三大要素，即光敏劑、光源和氧氣，光敏劑在光源的照射下激發并敏化氧分子，產生活性氧，從而對腫瘤造成殺傷作用。光動力治療存在腫瘤部位乏氧和長期療效不佳等限制。

近年來，納米藥物遞送系統的發展給光動力治療瓶頸問題的解決帶來了新的思路。為了解決腫瘤乏氧的問題，研究人員發展了多種自供氧納米藥物遞送系統，例如能夠催化腫瘤細胞內過氧化氫反應產生氧氣的納米二氧化錳、納米鐵酸錳和納米過氧化氫酶；能夠催化水光解產生氧氣的納米二氧化鈦和納米氮化碳；以及能夠自身攜帶氧氣的紅細胞膜包裹納米粒、納米血紅蛋白和全氟碳化合物納米乳劑等。

此外，研究人員發現二氫卟吩e6、脫鎂葉綠酸鹽A和金絲桃素等光敏劑除了能夠直接殺死腫瘤細胞、破壞腫瘤血管外，還能夠不同程度的誘導免疫原性細胞死亡。活性氧誘導的內質網應激被認為是光動力治療引起免疫原性細胞死亡的一大原因。為此，研究人員發展了內質網靶向光敏劑，并證實能夠誘導釋放更多具有免疫刺激的損傷相關模式分子，如外翻的內質網鈣網蛋白，分泌的三磷酸腺苷、高遷移率族蛋白B1和熱休克蛋白70等，從而激活機體的適應性抗腫瘤免疫應答，產生持續抗腫瘤作用。內質網靶向光敏劑有望改善光動力治療的長期預后。

目前內質網靶向光敏劑的研究主要有兩個方向，一個方向主要開發自身具有內質網靶向作用的新型光敏劑；另一個方向主要將內質網靶向分子與普通光敏劑相結合，以靶向內質網。目前已報道的內質網靶向光敏劑難以高選擇性地被腫瘤攝取，應用于光動力治療不但會導致治療效果欠佳，還可能引起毒副作用的產生。如何將光敏劑逐級靶向遞送至腫瘤細胞和內質網這一關鍵技術亟需解決。

發明內容

本發明的目的之一是提供腫瘤細胞、內質網逐級靶向納米乳劑，其具有腫瘤細胞、內質網逐級靶向功能，在660nm激光照射下，能夠產生更多的細胞內活性氧，導致鈣網蛋白外翻，具有更強的光動力殺傷腫瘤細胞作用。

本發明的另一目的是提供腫瘤細胞、內質網逐級靶向納米乳劑的制備方法，具體制備方法按照下述步驟進行：

(1)聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶聯物(化合物2)的制備

以聚乙二醇(化合物1)和2-十六烷基十八烷酸(2-Hexadecyloctadecanoic acid)為原料，以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)為縮合劑，4-二甲氨基吡啶(DMAP)為催化劑，以二氯甲烷做溶劑，室溫攪拌反應24～48小時，然后旋蒸除去二氯甲烷，加入超純水分散，轉移至透析袋中，于超純水中透析三天，8000轉/分鐘離心10分鐘，取上清冷凍干燥得到聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶聯物(化合物2)。反應式如下：

其中，聚乙二醇、2-十六烷基十八烷酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、4-二甲氨基吡啶摩爾比為1:1:5～10:0.5～2。

(2)生物素修飾的聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶聯物(化合物3)的制備