[發明專利]一種同時富集和分離血漿中2種抗癲癇藥物及其代謝產物的分子印跡膜的制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211362245.X
• 申請日: 2022-11-02
• 公開（公告）號: CN115739041A
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發明（設計）人: 杜巖;湯道權;尤宇欣;蔣函
• 申請（專利權）人: 徐州醫科大學
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤;王海云

1.一種同時富集和分離血漿中2種抗癲癇藥物及其代謝產物的分子印跡膜的制備方法，其特征在于，它包括如下步驟：

(1)基膜的活化：以聚偏二氟乙烯膜為基膜，將聚偏二氟乙烯膜在甲醇中浸潤，浸潤后的聚偏二氟乙烯膜采用蒸餾水沖洗，再將沖洗后的聚偏二氟乙烯膜在含偶氮二異丁腈的甲醇溶液中，進行活化處理；

(2)分子印跡聚合物預聚合：以奧卡西平為模板分子，將奧卡西平和甲基丙烯酸甲酯加入由乙腈和二甲基酰胺組成的致孔劑中，超聲分散后，在室溫的條件下進行預聚合反應；

(3)分子印跡膜的制備：向步驟(2)中所得預聚合溶液中加入二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二異丁腈，超聲分散后，加入步驟(1)中活化處理后的聚偏二氟乙烯膜，在室溫的條件下反應20～40min，再升溫至50～70℃進行聚合反應；

(4)模板分子的洗脫：以甲醇和乙酸組成的混合溶液為洗脫液，洗脫步驟(3)中所得產物中的模板分子，再用甲醇去除產物中的乙酸，得到分子印跡膜。

2.根據權利要求1的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，浸潤時間為20～30h，優選為24h；活化處理時間為5～15min，優選為10min。

3.根據權利要求1的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述奧卡西平和甲基丙烯酸甲酯的摩爾比為1:20～30，優選為1:24；超聲分散時間為10～20min；優選為15min；所述聚偏二氟乙烯膜的大小為2cm×2cm。

4.根據權利要求1的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中，每4平方厘米聚偏二氟乙烯膜添加奧卡西平的用量為0.1～0.3mmol，優選為0.25mmol；所述奧卡西平和致孔劑的摩爾體積比為1:5～15mol/L，優選為1:10mol/L；所述致孔劑中乙腈和二甲基酰胺的體積比為1:1～2；優選為1:1.5。

5.根據權利要求1的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述奧卡西平和二甲基丙烯酸乙二醇酯的摩爾比為1:10～20，優選為1:16；在步驟(3)中，所述奧卡西平和偶氮二異丁腈的摩爾比為1:0.2～0.6，優選為1:0.4。

6.根據權利要求1的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，超聲分散時間為10～20min；優選為15min；聚合反應溫度為55～65℃，優選為60℃；聚合反應時間為20～30h，優選為24h。

7.根據權利要求1的制備方法，其特征在于，在步驟(4)中，所述洗脫液中甲醇和乙酸的體積比為7～11:1；優選為9:1。

8.權利要求1所述的制備方法得到的分子印跡膜在同時富集和分離血漿中卡馬西平、奧卡西平、10,11-環氧卡馬西平和10,11-二氫-10-羥基卡馬西平中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，它包括如下步驟：采用液相色譜檢測經過分子印跡膜吸附處理后的血漿中的卡馬西平、奧卡西平、10,11-環氧卡馬西平和10,11-二氫-10-羥基卡馬西平；其中，液相色譜條件為：

色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠，采用流動相A和流動相B為混合流動相進行梯度洗脫，所述流動相A為乙腈；所述流動相B為1～10mM磷酸二氫鉀的水溶液；所述梯度洗脫過程如下：0～3min，71％B；3～3.5min，71％～62％B；3.5～4.5min，62％B；4.5～5min，62％～57％B；5～7.5min，57％B；7.5～8min，57％～71％B；8～10min，71％B；

所述分子印跡膜吸附處理后的血漿，按照如下過程處理：將分子印跡膜置于含卡馬西平、奧卡西平、10,11-環氧卡馬西平、10,11-二氫-10-羥基卡馬西平和內標甲氧卡馬西平的標注血漿樣本中進行吸附，吸附后的分子印跡膜再與甲醇混合進行解吸附，所得解吸附溶液，按照上述液相色譜條件進行檢測。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，色譜柱為Aglient Zorbax SB-C18柱，優選地，色譜柱的長度為150mm，直徑為4.6mm，填料粒徑為5μm；所述流動相B為5mM磷酸二氫鉀的水溶液；柱溫為30～40℃，優選為35℃；檢測波長為205～215nm，優選為210nm；流速為0.5～1.5mL/min，優選為1.0mL/min；進樣體積5～50μL，優選為10μL。