[發明專利]一種Fam50b蛋白多克隆抗體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202211346210.7
• 申請日: 2022-10-31
• 公開（公告）號: CN115806614A
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發明（設計）人: 邢俊俏;王衛華;劉紅妮;謝小燕;張熙琪;胡長峰
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;C12N15/70;G01N33/68
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 張杰

1.一種Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1.構建含有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重組表達載體；

步驟2.將重組表達載體轉化至大腸桿菌并誘導培養，再收集Fam50b重組蛋白，所述Fam50b重組蛋白含有SEQ ID NO.2所示的序列；

步驟3.將Fam50b重組蛋白作為抗原免疫動物，取動物抗血清得到多克隆抗體。

2.根據權利要求1所述Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟1具體為：以小鼠睪丸的總RNA為模板，反轉錄獲得cDNA，再以cDNA為模板通過PCR擴增得到含SEQ IDNO.1所示序列的目的片段，將該片段連接至原核表達載體即得。

3.根據權利要求2所述Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述PCR擴增所用引物序列如SEQ ID NO.3～4所示，所述重組表達載體的基礎載體為pGEX-6P-1，所述目的片段與載體pGEX-6P-1分別通過BamHⅠ酶和EcoRⅠ酶進行雙酶切后連接。

4.根據權利要求1所述Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟2所述大腸桿菌具體為大腸桿菌BL21(DE3)菌株。

5.根據權利要求1或4所述Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟2中誘導培養的條件為：終濃度為0.1～0.4mM IPTG。

6.根據權利要求1所述Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述Fam50b重組蛋白的收集方法為：離心收集菌沉淀，用PBS多次離心洗滌后，依次加入蛋白酶抑制劑和溶菌酶反應；將菌液超聲破碎，再加入終濃度為5～15％Triton-X100和0.5～2mMDTT進行孵育，離心取上清液，純化后即得重組蛋白。

7.根據權利要求1所述Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述動物為兔。

8.根據權利要求1或7所述Fam50b蛋白多克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟3中的免疫方式具體為：

初次免疫，用Fam50b重組蛋白與弗氏完全佐劑乳化混合后免疫實驗動物；

待初次免疫3周后，用Fam50b重組蛋白與弗氏不完全佐劑乳化混合后第二次免疫實驗動物，其中Fam50b重組蛋白用量為初次免疫的0.5倍；

待第二次免疫2周后，第三次免疫實驗動物且所用試劑與第二次免疫一致；

待第三次免疫2周后，用Fam50b重組蛋白與弗氏不完全佐劑乳化混合后第四次免疫實驗動物，其中Fam50b重組蛋白用量與初次免疫相同；

待第四次免疫完成1周后，即可取血分離抗體。

9.如權利要求1～8任一權利要求制備得到的Fam50b蛋白多克隆抗體。

10.如權利要求9所述的Fam50b蛋白多克隆抗體在制備檢測Fam50b蛋白產品中的應用。