[發(fā)明專利]一株產(chǎn)γ-氨基丁酸的植物乳桿菌WL02及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211340962.2
• 申請日: 2022-10-30
• 公開（公告）號: CN115521889A
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王莉;張小鳳;林淑敏
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/00;A23L2/38;A23L33/135;C12R1/25
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發(fā)明公開了一株高產(chǎn)γ?氨基丁酸的植物乳桿菌WL02及其用途，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。所述菌株為植物乳桿菌Lactobacillus plantarum WL02，該菌株于2021年12月27日保藏于中國微生物菌種保藏中心，保藏編號為：CGMCC NO:24200。通過優(yōu)化培養(yǎng)基與發(fā)酵條件，經(jīng)高效液相色譜法測定發(fā)酵液中γ?氨基丁酸的含量，篩選出具有高產(chǎn)γ?氨基丁酸能力和較高產(chǎn)酸能力及活力的乳酸菌；經(jīng)16rDNA測序分析將篩選出的菌株WL02鑒定為植物乳桿菌。本發(fā)明的菌株的耐酸耐膽鹽能力較強，可用于制作富含γ?氨基丁酸的功能食品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一株產(chǎn)γ-氨基丁酸的植物乳桿菌WL02及其用途。

背景技術(shù)

γ-氨基丁酸，是一種廣泛分布于自然界的非蛋白質(zhì)氨基酸。GABA具有抗疲勞、降血壓、改善睡眠以及提高人體記憶力等生理功能，是一種兼具藥理作用和保健功能的新型功能因子，現(xiàn)已被國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)為“新資源食品”，可用于乳制品、飲料和焙烤等食品中，在食品領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。

乳酸菌作為公認(rèn)的安全微生物，具有合成γ-氨基丁酸的能力。生物合成的γ-氨基丁酸具有安全性、經(jīng)濟(jì)性等優(yōu)點，因此，使乳酸菌發(fā)酵食品成為人們?nèi)粘＆?氨基丁酸營養(yǎng)強化的補充劑可進(jìn)一步為人類健康事業(yè)添磚加瓦。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有乳酸菌發(fā)酵獲得γ-氨基丁酸含量較低的不足和缺陷，提供一種高產(chǎn)γ-氨基丁酸的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)WL02并用于制備富含γ-氨基丁酸的谷物飲料。

所述高產(chǎn)γ-氨基丁酸的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)WL02，于2021年12月27日保藏于中國微生物菌種保藏中心，保藏編號為：CGMCC NO:24200。

所述植物乳桿菌WL02是從廣西長壽村人群腸道中分離所得，可利用常見的用于培養(yǎng)乳酸菌的培養(yǎng)基培養(yǎng)，例如MRS培養(yǎng)基。

所述植物乳桿菌WL02在MRS培養(yǎng)基或脫脂牛乳基質(zhì)培養(yǎng)基中37℃發(fā)酵24h后，發(fā)酵液的pH值分別為3.70和3.83，活菌數(shù)大于10⁹CFU/mL，可見植物乳桿菌WL02有較高的產(chǎn)酸能力及活力。在pH為3.0的人工胃液中存活率大于65.5％，在膽鹽濃度為0.10％、0.30％、0.50％的MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)3h存活率分別大于73.3％、41.5％及10.6％。

所述植物乳桿菌WL02在MRS培養(yǎng)基中37℃發(fā)酵24h，發(fā)酵液中γ-氨基丁酸含量超過18mg/100mL；在脫脂牛乳基質(zhì)培養(yǎng)基中37℃發(fā)酵24h后，發(fā)酵液中γ-氨基丁酸含量超過12mg/100mL；在優(yōu)化后的MRS培養(yǎng)基中37℃發(fā)酵24h后，發(fā)酵液中γ-氨基丁酸含量大于190mg/100mL；在藜麥基質(zhì)培養(yǎng)基中37℃發(fā)酵24h后，發(fā)酵液中γ-氨基丁酸含量大于350mg/100mL。

所述植物乳桿菌WL02在添加了5％的谷氨酸鈉及0.2％的維生素B₆的MRS培養(yǎng)基中，于37℃進(jìn)行培養(yǎng)48-60h，再按照5％的接菌量接入藜麥培養(yǎng)基，于37℃進(jìn)行培養(yǎng)48-60h，發(fā)酵液中γ-氨基丁酸含量501.86mg/100mL。

本發(fā)明提供了利用所述植物乳桿菌WL02制備GABA的方法，主要包括以下步驟：

(1)菌株活化：將植物乳桿菌WL02涂布于平板培養(yǎng)基上進(jìn)行活化培養(yǎng)，

平板培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10.0g，三水醋酸鈉3.0g，牛肉膏8.0g，檸檬酸三銨2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸鎂0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸錳0.04g，吐溫-80 1.0mL，磷酸氫二鉀2.0g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，調(diào)pH至6.4，

活化培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)時間為24～48h；