[發明專利]一種熱穩定性增強的D-甘露糖異構酶突變體在審
| 申請號： | 202211327476.7 | 申請日： | 2022-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN115820617A | 公開（公告）日： | 2023-03-21 |
| 發明（設計）人： | 丁重陽;沈玲;趙麗婷;陳磊;馬忠寶;徐萌萌;顧正華;李由然;徐沙;石貴陽 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/90 | 分類號： | C12N9/90;C12N15/61;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/24;C12P19/02;C12R1/19 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 熱穩定性 增強 甘露 糖異構酶 突變體 | ||
1.熱穩定性提高的D-甘露糖異構酶突變體，其特征在于，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列相對于SEQ ID NO.1在第241位、第116位、第379位或第253位是不同的。
2.根據權利要求1所述的熱穩定性提高的D-甘露糖異構酶突變體，其特征在于，所述D-甘露糖異構酶突變體的親本來源于Escherichia coli DH5α。
3.根據權利要求1或2所述的熱穩定性提高的D-甘露糖異構酶突變體，其特征在于，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第241位是脯氨酸，或，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第116位是纈氨酸，或，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第379位是脯氨酸，或，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第253位是丙氨酸，或，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第241位是脯氨酸，且第116位是纈氨酸。
4.根據權利要求1或2所述的熱穩定性提高的D-甘露糖異構酶突變體，其特征在于，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第241位是脯氨酸，且第253位是丙氨酸，或，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第241位是脯氨酸，且第283位是酪氨酸，或，
相對于SEQ ID NO.1，所述D-甘露糖異構酶突變體的氨基酸序列在第241位是脯氨酸，且第379位是脯氨酸。
5.編碼權利要求1～4任一所述突變體的基因。
6.用于表達權利要求1～4任一所述D-甘露糖異構酶突變體的大腸桿菌工程菌。
7.根據權利要求6所述的大腸桿菌工程菌，其特征在于，是以pET 28a(+)為表達載體。
8.制備權利要求1～4任一所述突變體的方法，其特征在于，具體步驟：
(1)將編碼D-甘露糖異構酶突變體的基因連接到表達載體上，得到重組表達載體，
(2)將重組表達載體轉入宿主，培養宿主，使得宿主表達D-甘露糖異構酶突變體，
(3)從宿主培養液中分離純化出D-甘露糖異構酶突變體。
9.提高Escherichia coli BL21來源的D-甘露糖異構酶的熱穩定性的方法，其特征在于，所述Escherichia coli BL21來源的D-甘露糖異構酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，將第241位、第116位、第379位或第253位進行替換。
10.權利要求1～4任一所述突變體在催化果糖合成甘露糖中的應用。
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