[發明專利]一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211326779.7
• 申請日: 2022-10-25
• 公開（公告）號: CN115531527A
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發明（設計）人: 黃葉娥;劉燕;鮑國連;崔雪梅;季權安
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61K39/39;A61P31/04;C12N1/20;C12N1/02;C12R1/01
• 代理公司: 北京華清迪源知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 丁彥峰

1.一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，包括：

步驟一，采用超濾濃縮法制備波氏桿菌外膜囊泡；

步驟二，采用薄膜分散法結合超聲法制備納米地黃多糖免疫佐劑；

步驟三，將制得的波氏桿菌外膜囊泡和納米地黃多糖免疫佐劑等體積混合后，通過裝有聚碳酸酯膜的納米粒擠壓器進行融合，經擠壓器來回擠壓，即得細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品。

2.根據權利要求1所述的一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，所述超濾濃縮法為先將單個菌落進行擴大培養；再將擴大培養的濾液進行離心、過濾后超濾、濃縮；濃縮液離心后重懸，得波氏桿菌外膜囊泡。

3.根據權利要求2所述的一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，所述擴大培養時，培養液中添加頭孢氨芐64μg/mL。

4.根據權利要求2所述的一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，所述過濾后超濾的條件為過濾是經過0.45μm的濾器；超濾裝置的截留分子量為100kDa。

5.根據權利要求2所述的一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，所述重懸為TE緩沖液重懸或PBS緩沖液重懸。

6.根據權利要求1所述的一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，所述薄膜分散法結合超聲法包括：

大豆卵磷脂、膽固醇和DSPE-PEG 2000溶于甲醇和氯仿混合液中，攪拌溶解，減壓旋轉蒸發除去有機溶劑；

瓶壁形成一層均勻的薄膜后，導入熟地多糖的水溶液，水化后繼續旋蒸；瓶壁薄膜完全洗脫，加入ddH₂O繼續旋轉蒸發；

蒸發結束后，利用探頭式超聲細胞粉碎機進行超聲粒徑均一化處理，再將粒徑均一化處理的溶液擠壓過微孔濾膜，得納米地黃多糖免疫佐劑。

7.根據權利要求6所述的一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，所述探頭式超聲細胞粉碎機得強度40％，10s開，10s停，工作時間2min。

8.根據權利要求1所述的一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品的制備方法，其特征在于，所述聚碳酸酯膜得粒徑為200nm。

9.一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品，其特征在于，是由權利要求1-8任一方法制備而成。

10.一種細菌外膜囊泡-納米地黃多糖產品在制備納米亞單位疫苗中的應用。