[發明專利]引物探針組合以及試劑盒

在審

• 申請號: 202211324990.5
• 申請日: 2022-10-27
• 公開（公告）號: CN116396958A
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 蘭定云;李進福;景培源;慎津進;薛寒;高利飛;鄭業煥
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/689;C12Q1/6851;C12R1/01
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳

1.引物探針組，其特征在于，其包括：

(1)、具有如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.7和/或SEQ?ID?NO.8任一所示的核苷酸序列的引物；和

(2)、具有如SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.6和/或SEQ?ID?NO.9任一所示的核苷酸序列的探針。

2.如權利要求1所述的引物探針組，其特征在于，其還包括：

(3)、具有如SEQ?ID?NO.10和/或SEQ?ID?NO.11所示核苷酸序列引物；和

(4)、具有如SEQ?ID?NO.12所示核苷酸序列的探針。

3.如權利要求1或2所述的引物探針組，其特征在于，其還具有：

(5)、如(1)～(4)任一所示的核苷酸序列的互補序列；和/或

(6)、如(1)～(5)任一所示的核苷酸序列經取代、缺失或添加一個或多個堿基獲得的核苷酸序列，且功能與(1)～(4)任一所示的相同或相似；和/或

(7)、與(1)～(6)任一所示的核苷酸序列同源性達到不低于80％的核苷酸序列。

4.如權利要求1至3任一項所述的引物探針組在制備用于鮑曼不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌和/或洋蔥伯克霍爾德菌檢測試劑盒中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述引物探針組或所述試劑盒的檢測結果的判斷標準包括：

如SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.6與SEQ?ID?NO.9所示探針通道CT值＞30或者無CT值，且SEQ?ID?NO.12所示探針通道的CT值≤35，報告檢測結果為陰性；和/或

如SEQ?ID?NO.3所示探針通道的CT值≤30，但SEQ?ID?NO.6和SEQ?ID?NO.9所示探針通道CT值＞30，報告為鮑曼不動桿菌陽性；和/或

如SEQ?ID?NO.6所示探針通道的CT值≤30，但SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.9所示探針通道CT值＞30，報告為嗜麥芽窄食單胞菌陽性；和/或

如SEQ?ID?NO.9所示探針通道的CT值≤30，但SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.6所示探針通道CT值＞30，報告為洋蔥伯克霍爾德菌陽性；和/或

當SEQ?ID?NO.12所示探針通道CT值＞35，出現：

a)陰性對照有CT值或呈典型S擴增曲線；或

b)陽性對照無CT值或無擴增曲線；

任一種情況，則檢測結果無效。

6.如權利要求4或5所述的應用，其特征在于，所述引物探針組或所述試劑盒的反應體系包括：1μL甜菜堿(5M)、1.5μL?DMSO、1μL?dNTPs(10mM)、0.1μL?UDG酶(1U/μL)、1μL?Tth酶(5U/μL)、3μL?MgCl₂(50mM)、1μL?SEQ?ID?NO.1(20mM)、1μL?SEQ?ID?NO.2(20mM)、0.5μL?SEQID?NO.3(20mM)、1μL?SEQ?ID?NO.4(20mM)、1μL?SEQ?ID?NO.5(20mM)、0.5μL?SEQ?ID?NO.6(20mM)、1μL?SEQ?ID?NO.7(20mM)、1μL?SEQ?ID?NO.8(20mM)、0.5μL?SEQ?ID?NO.9(20mM)、0.8μL?SEQ?ID?NO.10(20mM)、0.8μL?SEQ?ID?NO.11(20mM)和0.4μL?SEQ?ID?NO.12(20mM)，用滅菌純化水和核酸模板補足至50μL。

7.如權利要求4至6任一項所述的應用，其特征在于，所述引物探針組或所述試劑盒的反應程序包括：50℃2min；95℃預變性2min；95℃變性15s；60℃退火30s，返回變性然后退火并如此重復45個循環；25℃冷卻10s。

8.試劑盒，其特征在于，其包括如權利要求1至3任一項所述的引物探針組以及可接受的輔料或助劑。