[發明專利]口蝦蛄致敏蛋白AK的突變體及其應用

在審

• 申請號: 202211320812.5
• 申請日: 2022-10-26
• 公開（公告）號: CN115851658A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 劉光明;陳業欣;何欣蓉;楊陽;桓霏;楊世強;劉紅
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70;A61K39/35;A61P37/08
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 王鳳玲;尤懷成

1.一種口蝦蛄致敏蛋白AK的突變體，其特征在于，所述突變體是將口蝦蛄致敏蛋白AK氨基酸序列的第197位丙氨酸刪除，所述口蝦蛄致敏蛋白AK突變體的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。

2.一種編碼如權利要求1所述的口蝦蛄致敏蛋白AK的突變體的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一種重組載體，其特征在于，包含如權利要求2所述的基因。

4.一種制備口蝦蛄致敏蛋白AK的突變體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)以pET-22b-AK菌株所得的質粒為模板，SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10為引物進行重疊延伸PCR第一輪擴增，獲得第一產物；

(2)以所述第一產物為模板，SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8為引物進行重疊延伸PCR第二輪擴增，獲得第二產物，所述第二產物經擴增回收，獲得突變基因；

(3)將所述突變基因克隆入原核表達載體中，構建重組載體；

(4)將所述重組載體轉入宿主菌，誘導其表達并純化蛋白，以獲得所述突變體。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述pET-22b-AK菌株的制備包括：

(1)以口蝦蛄cDNA為模板，SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6為引物進行PCR擴增，獲得第三產物；

(2)將所述第三產物與pEASY-T1質粒連接，得到口蝦蛄pEASY-T1-AK質粒；

(3)以pEASY-T1質粒為模板，SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8為引物進行PCR擴增，獲得第四產物；

(4)將所述第四產物與pEASY-T1質粒連接，得到連接產物，連接產物轉化到Trans-T1感受態細胞，挑取單菌落進行菌落PCR驗證；

(5)將測序正確的菌株以及表達載體pET-22b菌株在37℃下活化過夜，收集菌體，提取質粒進行雙酶切，將酶切產物連接并構建重組載體轉入宿主菌，即得pET-22b-AK菌株。

6.如權利要求1所述的口蝦蛄致敏蛋白AK的突變體在制備預防或治療蝦類水產品過敏性疾病的藥物中的應用。