[發明專利]基于超聲輔助酶解法提取小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法

在審

• 申請號: 202211320415.8
• 申請日: 2022-10-26
• 公開（公告）號: CN115557830A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 李言;蔣雷;王立;聶陳志鵬;賀瑞坤;汪玉芳;樊銘聰;錢海峰
• 申請（專利權）人: 江南大學;湯臣倍健股份有限公司
• 主分類號: C07C37/68
• 分類號: C07C37/68;C07C37/82;C07C37/72;C07C37/70;C07C39/08;G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發明公開了基于超聲輔助酶解法提取小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，屬于天然產物或原料加工領域。本發明用酶對小麥麩皮粉進行處理，促進ARs的釋放，也促進酚酸類化合物等成分的溶出，再經后續的醇沉、濃縮純化處理從而被除去，以減輕物料中的雜質對烷基間苯二酚的干擾。本發明使用超聲輔助乙醇提取，提取液澄清、粘度低、產品雜質少，后續處理方便。

技術領域

本發明屬于天然產物或原料加工領域，具體涉及基于超聲輔助酶解法提取小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法。

背景技術

谷物中的生物標記物是谷物麩皮或胚芽中特有的物質，能較好反映麩皮或胚芽的含量進而用來監測脫殼、脫麩等生產過程以及鑒定全谷物產品是否有摻假。麥類是全球主食消費量最多的谷物之一，也是現有全谷物加工食品中數量最多的谷物來源，因此是全谷物標記物研究重點，也是全谷物標記物中研究相對較多的谷物。近年來的研究發現麥類谷物中存在一類特殊的酚類類脂——烷基間苯二酚(Alkylresorcinol，ARs)，可作為全麥食品的標記物。谷物中ARs的烷基側鏈一般為含有17～25個奇數碳原子的飽和碳鏈，分別可以表示為5-十七烷基間苯二酚(ARC17:0)、5-十九烷基間苯二酚(ARC19:0)、5-二十一烷基間苯二酚(ARC21:0)、5-二十三烷基間苯二酚(ARC23:0)、5-二十五烷基間苯二酚(ARC25:0)。ARs具有極性端和疏水烷基側鏈，微溶于水，主要溶于甲醇(當R＞19時溶解度有限)、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、己烷、丙醇、二氯甲烷和氯仿等有機溶劑。ARs自身具有熒光性。

ARs具有兩親性，其雙親性賦予了ARs一定的功能性，如抗氧化、抗腫瘤等，對多種慢性疾病有較好的改善作用。因此，具有高含量的ARs產品日益受到人們的重視。ARs特異地存在于小麥、小麥等麥類的麩皮中，而胚和胚乳中不含。其在被人體攝入后，可在血漿等生物樣本中檢測到其同系物或代謝物，當人們進食無麩皮的膳食時，則不能在血漿等生物樣本中檢測到。因此又可以作為全麥產品攝入的生物標志物。

目前，ARs的測定方法主要有分光光度法、液相熒光法、氣相色譜法等。LS/T 3244-2015《全麥粉》中全麥粉中的ARs含量的檢測方法采用振蕩提取法提取ARs，分光光度法檢測。行標中的振蕩提取法具有操作簡單、對設備要求低等優點，但存在提取時間長(48h)、前處理濃縮時間長(4～6h)、效率低、長時間運行對設備的損耗大等缺陷。目前糧食行業標準對于谷物中ARs的提取溶劑通常選用正丙醇、乙酸乙酯、甲醇和丙酮等多種有機溶劑進行提取，而通過研究發現，甲醇、丙酮和水的互溶性較強，而回收率極低，這是因為其極易將水溶性蛋白提取出來，產生較多雜質，不利于后續實驗。而正丙醇對ARs的回收率在80％以下。ARs作為雙親分子，其極性與乙酸乙酯相近，且其萃取液中共提物較少，且待測回收率高，基線干擾小，但乙酸乙酯作為有機試劑，提取成本高且氣味刺鼻，對人體有害。因此開發一種低成本且得率高的谷物麩皮中烷基間苯二酚的提取方法非常有意義。

發明內容

[技術問題]

本發明要解決的技術問題是現有提取烷基間苯二酚(Alkylresorcinol，ARs)的方法，存在耗時、回收率低、純度低的問題。

[技術方案]

本發明提供一種基于超聲輔助酶解法提取小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，主要包括以下步驟：

(1)預處理：先將小麥麩皮粉碎，過80目篩，備用；

(2)酶解：稱取1g(精確到0.01g)經步驟(1)預處理的麩皮于50mL離心管中，加入提前配置好的磷酸緩沖溶液，使pH穩定在5.0，分別加入α-淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、木質素酶中的至少一種，在50℃下酶解2h，而后煮沸5min，使酶失活；

(3)離心：在4000rpm的轉速下離心10min，將離心后收集的麩皮殘渣用乙醇浸提，將離心后收集的上清液用乙醇醇沉，乙醇醇沉后進行過濾并收集濾液，用旋轉蒸發儀在溫度為45℃的條件下將濾液旋干得到濃縮液1，備用；