[發(fā)明專利]基于超聲輔助酶解法提取小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法

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• 申請日: 2022-10-26
• 公開（公告）號: CN115557830A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李言;蔣雷;王立;聶陳志鵬;賀瑞坤;汪玉芳;樊銘聰;錢海峰
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué);湯臣倍健股份有限公司
• 主分類號: C07C37/68
• 分類號: C07C37/68;C07C37/82;C07C37/72;C07C37/70;C07C39/08;G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.提取、檢測小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，其特征在于，主要包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：先將小麥麩皮粉碎；

(2)酶解：稱取粉碎后的麩皮，加入磷酸緩沖溶液，并加入α-淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、木質(zhì)素酶中的至少一種，進(jìn)行酶解；

(3)離心：酶解結(jié)束后，將酶解液進(jìn)行離心，并將離心后收集的麩皮殘渣用乙醇浸提，將離心后收集的上清液用乙醇醇沉，乙醇醇沉后進(jìn)行過濾并收集濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液旋干得到濃縮液1，備用；

(4)乙醇浸提：向步驟(3)離心后收集的麩皮殘渣中加入乙醇，在室溫下進(jìn)行超聲浸提，將提取液離心，取上清液；

(5)旋干：將步驟(4)得到的上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干后得濃縮液2；

(6)硅膠柱層析純化：將濃縮液1、濃縮液2合并后采用硅膠柱層析純化，收集洗脫液；

(7)再濃縮：將步驟(6)收集的洗脫液旋蒸濃縮，經(jīng)氮吹吹干后用色譜級甲醇復(fù)溶；

(8)LC-MS檢測分析：將復(fù)溶樣品過濾后，進(jìn)行LC-MS分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取、檢測小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，其特征在于，步驟(1)將小麥麩皮粉碎，過80目篩，備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取、檢測小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，其特征在于，步驟(2)酶解：稱取1g經(jīng)步驟(1)預(yù)處理的麩皮于50mL離心管中，加入磷酸緩沖溶液，使pH穩(wěn)定在5.0，加入α-淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、木質(zhì)素酶中的至少一種，在50℃下酶解2h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取、檢測小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，其特征在于，步驟(4)乙醇浸提：向步驟(3)離心后收集的麩皮殘渣中加入乙醇，在室溫下進(jìn)行超聲浸提，超聲時間為1.5min，超聲功率為300W，將提取液離心，取上清液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取、檢測小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，其特征在于，步驟(6)，首先將100～200目硅膠粉置于105℃烘箱中活化30min，再置于干燥器中冷卻至室溫，稱取與硅膠粉同質(zhì)量的濃縮液樣品與硅膠粉一起倒入蒸發(fā)皿中并攪拌均勻，置于50℃烘箱過夜烘干，取出，冷卻至室溫備用；

選用500*40mm常壓玻璃層析柱，采用干法上樣，選用體積比為10：1的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，將每100mL洗脫液進(jìn)行旋蒸，使用TLC進(jìn)行跟蹤，使用HPLC分析并收集洗脫液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取、檢測小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，其特征在于，步驟(2)中纖維素酶的添加量為15mg/g_{小麥麩皮粉}，纖維素酶活力為60萬U/g。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取、檢測小麥麩皮中烷基間苯二酚的方法，其特征在于，所述步驟(6)中HPLC的條件為：①流動相：A相0.1％甲酸水溶液；B相0.1％甲酸甲醇溶液，流速：1mL/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μL；②流動相洗脫程序為：0min、A相15～25％、B相75～85％；5min、A相15～10％、B相75～90％；10min、A相5～10％、B相90～95％；15min、A相0～5％、B相95～100％；35min、A相15～25％、B相75～85％；③檢測器：采用DAD檢測器，檢測波長為280nm。