[發明專利]α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211314424.6
• 申請日: 2022-10-31
• 公開（公告）號: CN115594761A
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 劉紅兵;馬雪濤;譚建林;牛之瑞;方淑兵;欒杰;黃峻;劉陽;彭珍華
• 申請（專利權）人: 青島普瑞邦生物工程有限公司
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K14/765;C07K14/795;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;C12R1/91
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本申請涉及一種α、β、γ?鵝膏毒肽的單克隆抗體及其制備方法和應用。所述α?鵝膏毒肽的單克隆抗體由α?鵝膏毒肽人工抗原制得，所述β?鵝膏毒肽的單克隆抗體由β?鵝膏毒肽人工抗原制得，所述γ?鵝膏毒肽的單克隆抗體由γ?鵝膏毒肽人工抗原制得；所述α?鵝膏毒肽人工抗原為α?鵝膏毒肽與鑰孔血藍蛋白的偶聯物，所述β?鵝膏毒肽人工抗原為β?鵝膏毒肽與牛血清白蛋白的偶聯物，所述γ?鵝膏毒肽人工抗原為γ?鵝膏毒肽與人血清白蛋白的偶聯物。本申請的三種抗體之間具有較小的交叉反應率，可以同時檢測并區分樣品中的α?AMA、β?AMA、γ?AMA，具有較高的準確度。

技術領域

本申請涉及食品安全檢測技術領域，尤其涉及α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

在我國南方地區，由于地形、氣候等條件，孕育了豐富的可食用野生菌資源，但由于有些毒蘑菇和可食用野生菌沒有明顯的形態特征差別，也缺乏快速可靠的毒蘑菇鑒別方法，導致因誤食毒蘑菇而中毒死亡的事件頻繁發生。因此，蘑菇食物中毒一直以來是我國重點關注的食品安全問題之一。

據統計，在誤食毒蘑菇導致的中毒死亡事件中，高達70％的事件是因為誤食劇毒鵝膏菌引起的。鵝膏菌的致死性毒素是鵝膏肽類毒素，根據其氨基酸組成和結構可以分為鵝膏毒肽、鬼筆毒肽和毒傘肽三類。其中，鵝膏毒肽是一種雙環八肽，其化學性質十分穩定，一般的烹調加工無法破壞其毒性。因此，對鵝膏毒肽的檢測尤為重要。

目前，鵝膏毒肽的檢測方法主要有儀器分析方法和免疫學檢測法；儀器分析方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜聯用法(LC-MS/MS)等，其具有靈敏度高、檢測限低、重復性好等優點，但是上述方法存在檢測時間長、操作繁瑣以及儀器昂貴等問題，限制著其應用。免疫學檢測法主要是基于抗原抗體之間的特異性反應原理而建立，其具有快速、操作簡單、直觀等特點適合現場的初步檢測。

利用試紙條檢測鵝膏毒肽時，通常一個試紙條僅能檢測一類鵝膏毒肽，而不能很好的區分不同類型；這是因為抗體的特異性低，存在較大的交叉反應率。目前已分離鑒定的鵝膏毒肽有9類，其中，α-鵝膏毒肽(α-AMA)、β-鵝膏毒肽(β-AMA)、γ-鵝膏毒肽(γ-AMA)是導致死亡的主要毒素；但是在分別對α-AMA、β-AMA、γ-AMA進行檢測時，檢測時間較長，操作繁瑣，導致檢測效率較低；因此，如何能夠快速地對鵝膏毒肽進行檢測，并準確地判斷出鵝膏毒肽的類型，對于后續的救治具有重要意義。

發明內容

為了解決上述技術問題，本申請提供一種α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體及其制備方法和應用，本申請的α-鵝膏毒肽的單克隆抗體、β-鵝膏毒肽的單克隆抗體以及γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體之間的交叉反應率低，可以同時對α-AMA、β-AMA、γ-AMA進行檢測，具有檢測效率高、靈敏度高以及交叉反應率低的優點。

第一方面，本申請提供一種α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體，采用如下的技術方案：

一種α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體，所述α-鵝膏毒肽的單克隆抗體由α-鵝膏毒肽人工抗原制得，所述β-鵝膏毒肽的單克隆抗體由β-鵝膏毒肽人工抗原制得，所述γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體由γ-鵝膏毒肽人工抗原制得；

所述α-鵝膏毒肽人工抗原為α-鵝膏毒肽與鑰孔血藍蛋白的偶聯物，所述β-鵝膏毒肽人工抗原為β-鵝膏毒肽與牛血清白蛋白的偶聯物，所述γ-鵝膏毒肽人工抗原為γ-鵝膏毒肽與人血清白蛋白的偶聯物。