[發明專利]α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211314424.6
• 申請日: 2022-10-31
• 公開（公告）號: CN115594761A
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 劉紅兵;馬雪濤;譚建林;牛之瑞;方淑兵;欒杰;黃峻;劉陽;彭珍華
• 申請（專利權）人: 青島普瑞邦生物工程有限公司
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K14/765;C07K14/795;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;C12R1/91
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1.α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體，其特征在于，所述α-鵝膏毒肽的單克隆抗體由α-鵝膏毒肽人工抗原制得，所述β-鵝膏毒肽的單克隆抗體由β-鵝膏毒肽人工抗原制得，所述γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體由γ-鵝膏毒肽人工抗原制得；

所述α-鵝膏毒肽人工抗原為α-鵝膏毒肽與鑰孔血藍蛋白的偶聯物，所述β-鵝膏毒肽人工抗原為β-鵝膏毒肽與牛血清白蛋白的偶聯物，所述γ-鵝膏毒肽人工抗原為γ-鵝膏毒肽與人血清白蛋白的偶聯物。

2.根據權利要求1所述的α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體，其特征在于，所述α-鵝膏毒肽人工抗原通過戊二醛偶聯α-鵝膏毒肽上的氨基和鑰孔血藍蛋白上的氨基得到。

3.根據權利要求1所述的α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體，其特征在于，所述β-鵝膏毒肽人工抗原通過EDC、NHS活化β-鵝膏毒肽上的羧基，然后與牛血清白蛋白上的氨基結合后得到。

4.根據權利要求1所述的α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體，其特征在于，所述γ-鵝膏毒肽人工抗原通過戊二醛偶聯γ-鵝膏毒肽上的氨基和人血清白蛋白上的氨基得到。

5.一株分泌α-鵝膏毒肽單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于，所述雜交瘤細胞株被命名為AMA1，于2022年10月21日被保藏于中國典型培養物保藏中心；保藏地址：中國，武漢，武漢大學；保藏編號為CCTCCNO:C2022299。

6.一株分泌β-鵝膏毒肽單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于，所述雜交瘤細胞株被命名為AMA2，于2022年10月21日被保藏于中國典型培養物保藏中心；保藏地址：中國，武漢，武漢大學；保藏編號為CCTCCNO:C2022328。

7.一株分泌γ-鵝膏毒肽單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于，所述雜交瘤細胞株被命名為AMA3，于2022年10月21日被保藏于中國典型培養物保藏中心；保藏地址：中國，武漢，武漢大學；保藏編號為CCTCCNO:C2022329。

8.一種如權利要求1-4任意一項所述的α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

分別以α-鵝膏毒肽人工抗原、β-鵝膏毒肽人工抗原、γ-鵝膏毒肽人工抗原作為免疫原免疫健康小鼠；取免疫小鼠的脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞進行融合，篩選出陽性雜交瘤細胞株，經過抗體生產、純化后，分別得到α-鵝膏毒的單克隆抗體、β-鵝膏毒肽的單克隆抗體和γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體。

9.一種如權利要求1-4任意一項所述的α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體的應用，其特征在于，所述α-鵝膏毒肽的單克隆抗體、β-鵝膏毒肽的單克隆抗體、所述γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體用于制備檢測α-鵝膏毒肽、β-鵝膏毒肽、γ-鵝膏毒肽的試紙條或試劑盒。

10.根據權利要求9所述的α、β、γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體的應用，其特征在于，所述試紙條包括底板和底板上沿層析方向依次連接的樣品墊、結合墊、反應膜和吸水墊；

所述反應膜上沿層析方向依次設有用于檢測γ-鵝膏毒肽的T3檢測線、用于檢測β-鵝膏毒肽的T2檢測線、用于檢測α-鵝膏毒肽的T1檢測線和質控線；

所述T1檢測線上包被有α-鵝膏毒肽人工抗原，所述T2檢測線上包被有β-鵝膏毒肽人工抗原，所述T3檢測線上包被有γ-鵝膏毒肽人工抗原；

所述結合墊上包被有α-鵝膏毒肽的單克隆抗體、β-鵝膏毒肽的單克隆抗體和γ-鵝膏毒肽的單克隆抗體。