[發明專利]一種依替巴肽的制備方法

在審

• 申請號: 202211312908.7
• 申請日: 2022-10-25
• 公開（公告）號: CN115477688A
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發明（設計）人: 王敏錦;宋志英;朱寧;羅霞;段陳平
• 申請（專利權）人: 山西德元堂藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 柯胡成

1.一種依替巴肽的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

S1，以替代度為2.0~9.1 mmol/g的Fmoc-Rink Amide 氨甲基樹脂為載體，采用Fmoc固相多肽逐步縮合法，從N端至C端，將Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HomoArg(Boc)2-OH和三苯甲基巰基丙酸依次活化偶聯至所述載體上，其間依次脫去Fmoc保護基團，得到依替巴肽樹脂肽；

S2，對所述依替巴肽樹脂肽進行裂解后，經沉降、洗滌和干燥得到依替巴肽直鏈肽；

S3，將所述依替巴肽直鏈肽的水溶液與氧化劑混合，進行環化反應，獲得依替巴肽粗品；

S4，對所述依替巴肽粗品進行純化，獲得依替巴肽。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟S1中，所述活化偶聯過程中采用的縮合劑為DIC和HOBt，所述DIC和HOBt的摩爾比為1:1；

所述縮合劑中HOBt與Fmoc-Rink Amide 氨甲基樹脂的摩爾比為（2.4~2.6）:1；優選為（2.45~2.55）:1。

3. 根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟S1中，每一步氨基酸的活化偶聯過程中，使用的氨基酸與Fmoc-Rink Amide AM Resin的摩爾比為（2.3~2.5）:1；優選為（2.35~2.45）:1。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟S1中，所述活化偶聯的反應溫度為25~35℃，反應時間為2.5~3h。

5.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中，以體積分數計，所述裂解采用的裂解液中包括85~95%的三氟乙酸、5~10%的苯甲硫醚、1~5%的三異丙基硅烷和1~5%的水。

6.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述裂解液與依替巴肽樹脂肽的用量比為（5~10）mL/g。

7.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中，所述裂解的反應溫度10~30℃，反應時間為2.5~3h。

8.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中，所述沉降采用的試劑為甲基叔丁基醚或無水乙醚；優選為甲基叔丁基醚。

9.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟S3中，所述氧化劑為I₂/甲醇溶液；所述I₂/甲醇溶液中I₂的含量為5~10wt%。

10.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟S4中，所述純化采用高效液相色譜法進行，具體包括如下步驟：

T1，對所述依替巴肽粗品進行初次純化，初次純化采用的流動相為A相：乙腈，B相：10mmol/LNH₄Ac水溶液；采用梯度洗脫，A相17~22%，洗脫30min，收集純度大于99%的樣品；

T2，對步驟T1中收集樣品進行二次純化，二次純化采用的流動相為A相：乙腈，B相：0.5‰醋酸水溶液；采用梯度洗脫，A相18~26%，洗脫35min，收集純度大于99.5%樣品，得到所述依替巴肽。