[發明專利]一種利用凝乳酶輔助提取山羊乳細胞外囊泡的方法在審
| 申請號： | 202211312310.8 | 申請日： | 2022-10-25 |
| 公開（公告）號： | CN115678829A | 公開（公告）日： | 2023-02-03 |
| 發明（設計）人： | 安小鵬;宋宇軒;張磊;江悅;朱俊儒;李廣 | 申請（專利權）人： | 西北農林科技大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 黃明光 |
| 地址： | 712100 陜西*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 凝乳 輔助 提取 山羊 細胞 外囊泡 方法 | ||
1.一種利用凝乳酶輔助提取山羊乳細胞外囊泡的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
取乳樣上清A，加入凝乳酶后，按照2000-3000g的轉速離心收集上清B；
將所述上清B于4℃，按照80000-120000g的轉速離心30-40min，收集上清C，使用微濾膜過濾，收集濾液D；
將所述濾液D于4℃，按照80000-120000g的轉速離心60-80min，收集沉淀F即為細胞外囊泡粗產物；
將所述細胞外囊泡粗產物重懸，獲得的細胞外囊泡重懸樣本加到蔗糖墊上，于4℃，按照80000-120000g的轉速離心60-80min；
取出所述蔗糖墊，稀釋后，于4℃，按照80000-120000g的轉速離心60-80min，去除上清，所得沉淀即為山羊乳細胞外囊泡。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述凝乳酶的使用濃度為0.03-0.05mg/mL，添加量為1.75mg/50mL乳液上清。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟還包括，將所述濾液D于4℃，按照80000-120000g的轉速離心60-80min，收集沉淀E；
將所述沉淀E重懸后，于4℃，按照80000-120000g的轉速離心60-80min，收集沉淀F為細胞外囊泡粗產物。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述蔗糖墊濃度為30％。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞外囊泡重懸樣本與蔗糖墊的體積比為2:1-5:1。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述山羊乳細胞外囊泡直接置于-80℃保存，或稀釋后于-80℃保存。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳樣上清A的獲得方法包括如下步驟：取乳樣，于4℃，按照3000-5000g的轉速離心10min，收集上清即為乳樣上清A。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述乳樣為山羊乳，所述山羊乳為新鮮乳液，或凍存于-80℃，使用時于37℃下解凍后的乳液。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述使用微濾膜過濾為使用0.45μm濾膜過濾。
10.一種山羊乳細胞外囊泡，其特征在于，采用權利要求1-9任意一項所述的利用凝乳酶輔助提取山羊乳細胞外囊泡的方法獲得。
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