[發(fā)明專利]一種肝素芐基酯酯化程度的檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211299327.4
• 申請(qǐng)日: 2022-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN115541644A
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王建強(qiáng);楊海濱;吳曉明;王鈺琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 煙臺(tái)東誠(chéng)藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N24/08
• 分類號(hào): G01N24/08
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• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種肝素芐基酯酯化程度的檢測(cè)方法，其特征是采用以下步驟：a.采集肝素芐基酯的核磁數(shù)據(jù)；b.對(duì)核磁數(shù)據(jù)進(jìn)行積分處理；c.計(jì)算芐基酯中苯環(huán)基團(tuán)積分所占積分比例；d.根據(jù)積分比例評(píng)價(jià)肝素芐基酯的酯化程度。本發(fā)明方法，樣品處理簡(jiǎn)單易行，樣品上機(jī)分析時(shí)間短，適于酯化反應(yīng)制備的肝素芐基酯的酯化程度進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的測(cè)定，以評(píng)價(jià)該肝素芐基酯的酯化程度，為依諾肝素鈉生產(chǎn)過(guò)程的中間體質(zhì)量控制提供快速可靠的技術(shù)數(shù)據(jù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種用核磁采集肝素芐基酯譜圖并積分分析其酯化程度的方法。

背景技術(shù)

依諾肝素鈉是肝素鈉經(jīng)降解后制得的一種低分子肝素，因其出血副作用小、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長(zhǎng)等特點(diǎn)，成為市場(chǎng)主要的抗凝藥物。其制備工藝的主要步驟為堿降解肝素芐基酯，而肝素芐基酯的酯化程度則決定了堿降解的降解條件和依諾肝素鈉成品的特征結(jié)構(gòu)。

現(xiàn)有分析檢測(cè)肝素芐基酯酯化程度的方法為專利《依諾肝素鈉生產(chǎn)過(guò)程中肝素芐基酯的酯化率的檢測(cè)方法》，CN103175925B，該方法先將肝素芐基酯在堿性環(huán)境中進(jìn)行脫芐基反應(yīng)生成苯甲醇，再用高效液相色譜儀分析反應(yīng)液中苯甲醇的含量，通過(guò)苯甲醇的含量計(jì)算肝素芐基酯的酯化率，以此來(lái)評(píng)價(jià)肝素芐基酯的酯化程度。現(xiàn)有方法反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、需對(duì)照組、準(zhǔn)確度低、重復(fù)性差。本發(fā)明利用核磁共振波譜儀檢測(cè)肝素芐基酯酯化程度的方法，精確性高、重復(fù)性好，能夠大大提高降解工藝的穩(wěn)定性和依諾肝素鈉成品的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有測(cè)定酯化率的方法周期長(zhǎng)、準(zhǔn)確度低、重復(fù)性差等問(wèn)題，提供一種簡(jiǎn)便易行、穩(wěn)定可靠，能有效分析肝素芐基酯酯化程度的方法。

為實(shí)行上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種肝素芐基酯酯化程度的檢測(cè)方法，其特征是采用以下步驟：

a.采集肝素芐基酯的核磁譜圖；

b.對(duì)核磁譜圖進(jìn)行積分處理；

c.計(jì)算芐基酯中苯環(huán)基團(tuán)積分所占積分比例；

d.根據(jù)積分比例評(píng)價(jià)肝素芐基酯的酯化程度。

X ×100%

X：芐基酯中苯環(huán)基團(tuán)積分所占積分比例

∫x：芐基酯中苯環(huán)基團(tuán)積分

∫s：各段積分總和

根據(jù)所述的分析檢測(cè)肝素芐基酯酯化程度的方法，其特征是采用以下步驟：

優(yōu)選地，所述肝素芐基酯配制為濃度為0.05mg/μL~0.20mg/μL的肝素芐基酯氘代水溶液；優(yōu)選地，所述核磁譜圖采用核磁共振氫譜；優(yōu)選地，核磁共振氫譜采集參數(shù)設(shè)置，采樣點(diǎn)數(shù)（TD）為65536，掃描次數(shù)（NS）為16，譜寬（SW）為20ppm，采樣溫度為298K；

對(duì)采集所得氫譜進(jìn)行分段積分，優(yōu)選地，分段化學(xué)位移自低場(chǎng)依次為8.00-6.99、6.00-4.97、4.62-4.08、4.07-3.51、3.51-3.05、2.32-1.87、1.40-1.11；

所述化學(xué)位移8.00-6.99段為芐基酯中苯環(huán)基團(tuán)特征氫譜，計(jì)算此段氫譜積分所占各段積分總和比例。

從結(jié)構(gòu)式（見圖5）分析，肝素芐基酯為肝素鈉與芐基酯化連接而成，不同酯化程度肝素芐基酯，芐基含量會(huì)呈現(xiàn)差異，在肝素芐基酯核磁譜圖中明顯表現(xiàn)為苯環(huán)氫含量差異，以此反映酯化程度。

本發(fā)明方法，樣品處理簡(jiǎn)單易行，樣品上機(jī)分析時(shí)間短，適于酯化反應(yīng)制備的肝素芐基酯的酯化程度進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的測(cè)定，以評(píng)價(jià)該肝素芐基酯的酯化程度，為依諾肝素鈉生產(chǎn)過(guò)程的中間體質(zhì)量控制提供快速可靠的技術(shù)數(shù)據(jù)支持。

附圖說(shuō)明

圖1 實(shí)施例一氫譜圖；

圖2 實(shí)施例二氫譜圖；

圖3 實(shí)施例三氫譜圖；

圖4 實(shí)施例四氫譜圖；