[發明專利]胎盤間充質干細胞制備的外泌體及其用途

在審

• 申請號: 202211289694.6
• 申請日: 2022-10-20
• 公開（公告）號: CN115558638A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 魏卿;肖海蓉;劉慶喜;裴麗環
• 申請（專利權）人: 博雅干細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P29/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及胎盤間充質干細胞制備的外泌體及其用途。一方面，本發明涉及使用胎盤間充質干細胞分離提取的外泌體，其具有50～200nm的平均粒徑，并且其表達了膜蛋白CD9和膜蛋白CD81，該外泌體膜蛋白CD9的陽性表達率大于65％，膜蛋白CD81的陽性表達率大于75％。該外泌體制法為：將間充質干細胞接種至培養瓶中，培養使細胞貼壁，再向培養液中添加IL?1β培養；更換完全培養基后于37℃、2％O₂、5％CO₂培養箱中培養；使細胞進行差速離心得到呈懸液形式的外泌體。本發明還涉及所制備的外泌體在制備用于治療炎性疾病的藥物中的用途。本發明方法具有外泌體收率高、活性高等優點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種培養間充質干細胞獲取外泌體的方法。具體涉及一種采用炎性因子及低氧環境下誘導培養間充質干細胞分泌外泌體并提取的方法，該方法獲取的外泌體在可顯著的提高細胞的抗炎活性。

本發明的間充質干細胞是從胎盤分離和傳代培養獲得的。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是來源于中胚層的一類非造血系統多能干細胞，現已證實MSCs除具有自我更新自我復制和多向分化潛能外，還具有很強的抗炎和抑制多種免疫細胞的能力，并能夠誘導外周免疫耐受。研究表明MSCs通過分泌多種免疫調節因子，如IFN-γ、PGE2等(可參見：Polchert D,Sobinsky J,Douglas G,Kidd M,Moadsiri A,Reina E,et al.IFN-gamma activation of mesenchymal stem cells fortreatment and prevention of graft versus host disease.European journal ofimmunology.2008；38(6):1745-55.以及Spaggiari GM,Abdelrazik H,Becchetti F,Moretta L.MSCs inhibit monocyte-derived DC maturation and function byselectively interfering with the generation of immature DCs:central role ofMSC-derived prostaglandin E2.Blood.2009；113(26):6576-83.)，從而抑制免疫細胞(如T細胞、B細胞、NK細胞、抗原呈遞細胞等)的功能(可參見：Corcione A,Benvenuto F,Ferretti E,Giunti D,Cappiello V,Cazzanti F,et al.Human mesenchymal stem cellsmodulate B-cell functions.Blood.2006；107(1):367-72.以及Di Nicola M,CarloStella C,Magni M,Milanesi M,Longoni PD,Matteucci P,et al.Human bonemarrow stromal cells suppress T-lymphocyte proliferation induced by cellularor nonspecific mitogenic stimuli.Blood.2002；99(10):3838-43.)。

間充質干細胞的免疫原性低。基于MSCs的細胞治療已成功應用于心血管系統疾病，骨、軟骨缺損，糖尿病等疾病的治療。MSCs通過旁分泌和自分泌釋放多種細胞因子和生長因子，這些分泌的生物活性因子能夠抑制纖維化和凋亡，增強血管生成，參與組織修復再生。

間充質干細胞來源豐富，可取自臍帶、胎盤、骨髓、臍血、脂肪等組織。