[發(fā)明專利]檢測(cè)狼瘡性腎炎標(biāo)志物的試劑及方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211284174.6
• 申請(qǐng)日: 2022-10-14
• 公開（公告）號(hào): CN116400075A
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳崴;蔣小云;彭穗;周怡;唐睿晗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/58;C07K16/28
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中

本發(fā)明屬于多重免疫組化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)狼瘡性腎炎標(biāo)志物的試劑及方法，所述標(biāo)志物為DC3細(xì)胞，所述試劑包括抗CD163抗體與抗CD11c抗體、抗CD1c抗體中的至少一種，本發(fā)明操作方便、簡(jiǎn)單，能在較短的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)LN患者腎臟DC3細(xì)胞的數(shù)量，對(duì)其浸潤(rùn)程度進(jìn)行評(píng)估；特異性好，本發(fā)明根據(jù)DC3細(xì)胞的特征基因設(shè)計(jì)抗體，可準(zhǔn)確對(duì)LN患者腎臟DC3細(xì)胞進(jìn)行定量檢測(cè)，具有較高的特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于多重免疫組化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)狼瘡性腎炎標(biāo)志物的試劑及方法。

背景技術(shù)

狼瘡性腎炎（lupus?nephritis,?LN）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic?lupuserythematosus，SLE）最常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥。治療未達(dá)緩解的LN患者中有10～30%會(huì)進(jìn)展至終末期腎病，嚴(yán)重時(shí)危及生命，故準(zhǔn)確預(yù)測(cè)LN患者療效在指導(dǎo)臨床、制定個(gè)體化治療方案中至關(guān)重要。然而，目前尚無(wú)公認(rèn)的預(yù)測(cè)LN患者誘導(dǎo)緩解治療療效的臨床、病理和生物學(xué)指標(biāo)。近年來(lái)，有研究采用腎間質(zhì)炎癥、纖維化和透明血栓等腎臟病理特征聯(lián)合尿蛋白肌酐比、估算腎小球?yàn)V過(guò)率、血清抗雙鏈DNA抗體和補(bǔ)體3水平，以及血管細(xì)胞粘附分子1、趨化因子配體2等指標(biāo)構(gòu)建LN誘導(dǎo)緩解治療療效的預(yù)測(cè)模型，但因樣本量小、異質(zhì)性大、缺乏外部驗(yàn)證或需多個(gè)預(yù)測(cè)指標(biāo)聯(lián)合等因素限制，尚未能達(dá)到臨床應(yīng)用水平。

通過(guò)對(duì)LN患者腎穿刺樣本進(jìn)行scRNAseq，深度剖析了LN腎臟的微環(huán)境，我們發(fā)現(xiàn)：LN腎臟中DC3是與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)的細(xì)胞亞群；DC3可以作為預(yù)測(cè)LN患者誘導(dǎo)治療療效的標(biāo)記物；DC3具有很強(qiáng)的促炎能力，可通過(guò)分泌細(xì)胞因子、提呈抗原的作用募集、激活多種CD4⁺T細(xì)胞，驅(qū)動(dòng)免疫反應(yīng)并造成組織損傷；腎臟損傷的小管上皮細(xì)胞可以分泌趨化因子和粘附分子促進(jìn)DC3的募集和粘附，促使更多DC3停留在小管間質(zhì)激活T細(xì)胞，聚集形成炎癥浸潤(rùn)灶，加重腎臟損傷，為L(zhǎng)N的發(fā)病機(jī)制提供了新見解，為治療策略的制定及療效的預(yù)測(cè)提供了新的方向。

盡管免疫組織化學(xué)染色及成像分析是研究組織形態(tài)和組織原位抗原表達(dá)不可或缺的檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于臨床病理診斷等領(lǐng)域，但是受制于傳統(tǒng)單標(biāo)記免疫組織化學(xué)染色方法的限制，通常只能對(duì)組織中的一到兩種抗原進(jìn)行染色分析傳統(tǒng)的免疫組織化學(xué)染色或免疫熒光染色。而新的mIHC技術(shù)能夠在同一張組織切片樣本上同時(shí)檢測(cè)多種靶標(biāo)分子，獲得關(guān)于特殊細(xì)胞定量和空間排列的多通道信息，而且配備專業(yè)分析軟件，具有高重復(fù)性、高效率和高成本效益的優(yōu)勢(shì)，而根據(jù)mIHC檢測(cè)的原理，抗體的選擇極大的影響了檢測(cè)的靈敏性和特異性，現(xiàn)未有針對(duì)腎臟中DC3細(xì)胞多重免疫組化檢測(cè)方法，并用于將mIHC應(yīng)用于預(yù)測(cè)LN治療效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是針對(duì)背景技術(shù)存在的問(wèn)題，提供一種檢測(cè)狼瘡性腎炎標(biāo)志物的試劑及方法，為狼瘡性腎炎診標(biāo)志物的檢測(cè)提供一種解決方案。

為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

檢測(cè)狼瘡性腎炎標(biāo)志物的試劑，所述標(biāo)志物為DC3細(xì)胞，所述試劑包括抗CD163抗體與抗CD11c抗體、抗CD1c抗體中的至少一種。

優(yōu)選的，所述試劑包括抗CD11c抗體和抗CD163抗體。

本發(fā)明還提供了一種試劑盒，包括上述抗體的試劑。

可以理解的是，在本發(fā)明提供檢測(cè)試劑下，可采用多種檢測(cè)方法對(duì)本發(fā)明中的標(biāo)志物DC3細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，可供選擇的如免疫熒光技術(shù)（IF）、免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC）、流式細(xì)胞術(shù)等。

作為一個(gè)具體的實(shí)施例，本發(fā)明提供了一種多重免疫組化檢測(cè)用試劑盒，所述試劑盒包括：

一抗：Anti-CD11c抗體、Anti-CD163抗體；HRP二抗：HRP標(biāo)記二抗；TSA熒光染料；DAPI染色液。