[發(fā)明專利]一種利用CD276評價間充質(zhì)干細胞生物學效力的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211276848.8
• 申請日: 2022-10-19
• 公開（公告）號: CN115356487B
• 公開（公告）日: 2023-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 杜文靜;韓之波;李文學;喻昊;趙夢;嚴淑琳;賈紅紅;毛愛斌;聶釩宇
• 申請（專利權(quán)）人: 天津昂賽細胞基因工程有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/50
• 代理公司: 北京同輝知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 何靜

本發(fā)明公開了一種利用CD276評價間充質(zhì)干細胞生物學效力的方法，通過計數(shù)細胞后，裂解單位數(shù)量的細胞，收集細胞裂解液后，采用ELISA方法檢測裂解液中CD276的蛋白含量來評價該間充質(zhì)干細胞的生物學效力，所述生物學效力是指與活化外周血單個核細胞共培養(yǎng)，對外周血單個核細胞分泌IFN?γ和TNF?α的抑制能力，本發(fā)明不同于以往檢測細胞培養(yǎng)上清中的因子來評估間充質(zhì)干細胞生物學效力的方法，本發(fā)明通過ELISA的方法檢測一定數(shù)目細胞的裂解液中的CD276的含量即可快速判斷該細胞的生物學效力，簡便快捷，具有廣闊的應用前景，有利于推廣應用。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學技術領域，尤其涉及一種利用CD276評價間充質(zhì)干細胞生物學效力的方法。

背景技術

間充干細胞（Mesenchymal?stem?cell,?MSC）是一群起源于中胚層的的亞全能干細胞，具備自我更新、多向分化、免疫調(diào)節(jié)、組織損傷修復、抗纖維化、促進血管新生等多項生物學功能。目前已知的MSC調(diào)控免疫應答的方式主要通過旁分泌和直接接觸介導（Mesenchymal?stem/stromal?cells?as?a?valuable?source?for?the?treatment?ofimmune-mediated?disorders.?Stem?Cell?Res?Ther.?2021?Mar?18;12(1):192），其中旁分泌效力因子主要包括?PGE2，IDO，IL-10，TGF-beta,?TSG-6等，而細胞接觸效力分子主要包括膜蛋白ICAM-1，VCAM-1，TLR3，TLR4，PD-L1和PD-L2等?(Mesenchymal?stem?cellimmunomodulation:?mechanisms?and?therapeutic?potential.?Trends?PharmacolSci.2020?Sep;?41(9):6530664;?Immunoregulatory?mechanisms?of?mesenchymal?stemand?stromal?cells?in?inflammatory?disease.?Nature?Reviews?Nephrology?14,?493-507?(2018).?)。

由于具備多種生物學功能，MSC具備藥物屬性，但因其存在顯著的細胞異質(zhì)性，且其介導免疫調(diào)控的作用機理非常復雜且難以確定標準品，而使得其生物效力評價成為其質(zhì)量控制的難題。目前間充質(zhì)干細胞的質(zhì)量檢驗標準中免疫學反應檢測中的內(nèi)容主要包括下述三方面：（1）淋巴細胞增殖抑制檢測；（2）特定淋巴細胞亞群檢測（Th1/Treg/Th17）；（3）淋巴細胞分泌TNF-α抑制試驗。由于檢測內(nèi)容復雜和批量檢測的高額成本，MSC藥物的替代性功能指標成為企業(yè)和科研結(jié)構(gòu)爭相研究的熱點。替代性功能指標即用特定的細胞因子或蛋白與細胞的生物學效力建立聯(lián)系，并以此作為其質(zhì)量評價的方法。現(xiàn)在被報道用于評價間充質(zhì)干細胞生物學效力的替代性標志物，包括公開號為CN109576334A的發(fā)明專利公開的PGE2，公開號為CN110938668的發(fā)明專利公開的TNFRI，公開號為CN102643909B的發(fā)明專利公開的Galectin-3等。但可溶性細胞因子存在一個關鍵問題，即其自身不夠穩(wěn)定，極容易降解，保存的難度較大。同時，收集和檢測的過程需要較長時間，人為操作較多，步驟繁瑣容易污染等。