[發(fā)明專利]一種利用HPLC測定丙硫異煙胺中雜質(zhì)含量的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202211276152.5
• 申請日: 2022-10-18
• 公開（公告）號: CN115629139A
• 公開（公告）日: 2023-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高政;左帥;徐偉;顧麗;周菊;魏征;耿炎
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇慈星藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 南京智轉(zhuǎn)慧移知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32649
• 代理人: 邢少華

1.一種利用HPLC測定丙硫異煙胺中雜質(zhì)含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)配置供試品溶液和對照溶液；

2)設(shè)置高效液相檢測條件：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，規(guī)格為250mm×4.6mm，填料粒徑為5μm，柱溫為35℃，以緩沖鹽為流動相A，以乙腈為流動相B；流速為1.0mL/min進行梯度洗脫；

3)分別精密吸取供試品溶液和對照溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；

所述供試品溶液的制備是方法為：取丙硫異煙胺，用乙腈溶解稀釋成每1mL中含丙硫異煙胺1mg的溶液作為供試品溶液；所述對照溶液的制備方法為：取丙硫異煙胺對照品10mg、雜質(zhì)A對照品、雜質(zhì)B對照品、雜質(zhì)C對照品和雜質(zhì)D對照品各15mg、雜質(zhì)E對照品25mg，置不同10mL量瓶中用乙腈超聲溶解并稀釋至刻度，作為各化合物對照品儲備液I；精密量取丙硫異煙胺對照品、雜質(zhì)A對照品、雜質(zhì)B對照品、雜質(zhì)C對照品和雜質(zhì)D對照品儲備液I各2.5mL，雜質(zhì)E對照品儲備液I5mL置同一50mL量瓶，加稀釋劑稀釋至刻度，作為對照品儲備液II；精密量取對照品儲備液II1mL置50mL量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，作為對照品溶液；

所述丙硫異煙胺中雜質(zhì)包括雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D和雜質(zhì)E；所述雜質(zhì)A為4-氰基吡啶、雜質(zhì)B為2-丙基-4-氰基吡啶、雜質(zhì)C為異硫酰胺、雜質(zhì)D為2-丙基異煙酰胺，雜質(zhì)E為乙硫異煙胺。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用HPLC測定丙硫異煙胺中雜質(zhì)含量的方法，其特征在于，步驟2)中，所述緩沖鹽為2g/l磷酸二氫鈉，用磷酸調(diào)節(jié)PH至3.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用HPLC測定丙硫異煙胺中雜質(zhì)含量的方法，其特征在于，步驟2)中，所述梯度洗脫的條件為：0-8min，流動相A的體積百分比為95％，流動相B的體積百分比為5％；8-40min，流動相A的體積百分比從95％過渡到60％，流動相B的體積百分比從5％過渡40％；40-50min，流動相A的體積百分比為60％，流動相B的體積百分比為40％；50-50.1min，流動相A的體積百分比從60％過渡到95％，流動相B的體積百分比從40％過渡到5％；50.1-55min，流動相A的體積百分比為95％，流動相B的體積百分比為5％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用HPLC測定丙硫異煙胺中雜質(zhì)含量的方法，其特征在于，步驟3)中，所述供試品溶液與對照溶液的進樣量分別為10μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用HPLC測定丙硫異煙胺中雜質(zhì)含量的方法，其特征在于，步驟3)中，所述液相色譜儀的紫外檢測器的的檢測波長為282nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用HPLC測定丙硫異煙胺中雜質(zhì)含量的方法，其特征在于，供試品溶液色譜圖中如有與對照品溶液色譜圖中保留時間一致的雜質(zhì)，按外標法以峰面積計算，4-氰基吡啶、2-丙基-4-氰基吡啶、異硫酰胺和2-丙基異煙酰胺均不得過0.15％，乙硫異煙胺不得過0.5％，供試品溶液色譜圖扣除空白溶劑峰，如有其它未知雜質(zhì)，按主成分外標法以峰面積計算，不得過0.10％。