[發明專利]一種大腸埃希菌快速核酸檢測的引物組合及檢測方法

在審

• 申請號: 202211275816.6
• 申請日: 2022-10-18
• 公開（公告）號: CN116144808A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 王保寧;劉人捷;符立發;索朗斯珠;陳昱作
• 申請（專利權）人: 四川大學;西藏農牧學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19
• 代理公司: 四川北新律師事務所 51366
• 代理人: 李琳

1.一種大腸埃希菌快速核酸檢測的引物組合，其特征在于，所述引物組合為引物組合1，所述引物組合1包括正向內引物uidA1-FIP、反向內引物uidA1-BIP、正向環引物uidA1-LoopF、反向環引物uidA1-LoopB、正向外引物uidA1-F3、反向外引物uidA1-B3；所述引物組合1中各引物序列分別為：

(1)正向內引物uidA1-FIP：

GCCCAGTCGAGCATCTCTTCAG-GGATTGGGGCCAACTCCT(序列表序列號1所示)；

(2)反向內引物uidA1-BIP：

ATGAAACTGCTGCTGTCGGCT-CAGTTCTTTCGGCTTGTTGC(序列表序列號2所示)；

(3)正向環引物uidA1-LoopF：

GGGTAATGCGAGGTACGGT(序列表序列號3所示)；

(4)反向環引物uidA1-LoopB：

AACCTCTCTTTAGGCATTGGTTTCG(序列表序列號4所示)；

(5)正向外引物uidA1-F3：

CGACCACGCATTAATGGACT(序列表序列號5所示)；

(6)反向外引物uidA1-B3：

TGACTGCCTCTTCGCTGTA(序列表序列號6所示)。

2.根據權利要求1所述的一種大腸埃希菌快速核酸檢測的引物組合，其特征在于，所述引物組合1對大腸埃希菌的檢測限為1.0×10¹CFU/mL。

3.一種大腸埃希菌快速核酸檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)熱裂解法處理樣本，獲取樣本DNA；

(2)進行LAMP可視化檢測，所述LAMP可視化檢測步驟包括樣本DNA、LAMP反應體系、采用的反應條件；

(3)可視化結果觀察，反應體系顏色為紅色，則為陰性結果；反應體系顏色為黃色，則為陽性結果。

4.根據權利要求2所述的一種大腸埃希菌快速核酸檢測方法，其特征在于，所述LAMP反應體系包括LAMP反應液、權利要求1所述的引物組合1Mix；所述LAMP反應液包括1.4mmol/LdNTP?Mix、20mmol/L?Tris-HCl、10mmol/LKCl、10mmol/L(NH4)₂SO₄、6mmol/LMgSO₄、0.1％Triton?X-100、320U/mLBst?DNA聚合酶、10μmol/L苯酚紅酸堿指示劑；所述引物組合1Mix包括0.2μmol/LuidA1-F3、0.2μmol/L?uidA1-B3、1.6μmol/L?uidA1-FIP、1.6μmol/L?uidA1-BIP、0.8μmol/LuidA1-LoopF、0.8μmol/LuidA1-LoopB。

5.根據權利要求2所述的一種大腸埃希菌快速核酸檢測方法，其特征在于，所述反應條件包括反應溫度60℃-65℃和反應時間30-60min。

6.權利要求1-5所述的一種大腸埃希菌快速核酸檢測的引物組合及檢測方法在大腸埃希菌檢測試劑盒中的應用。