[發明專利]一種通過鹽堿地扦插枝條招募林木促生抗逆內生真菌的方法

在審

• 申請號: 202211273853.3
• 申請日: 2022-10-18
• 公開（公告）號: CN115725415A
• 公開（公告）日: 2023-03-03
• 發明（設計）人: 鐘非;季文惠;朱蓉;謝東青;李忻桐;劉國元;余春梅;陳艷紅;連博琳;魏輝;張健
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/14;C12Q1/04;A01G2/10;A01G22/00;A01B79/02;A01G7/06;C12R1/66;C12R1/79;C12R1/645
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 強萌

本發明公開了一種通過鹽堿地扦插枝條招募林木促生抗逆內生真菌的方法，該方法在對鹽堿地進行初步改良以適應林木扦插條生長后，通過林木扦插條從自然生態系統招募真菌，并從林木根系中進行分離純化，得到具有促生抗逆潛力的內生真菌，有利于避免非土著真菌競爭能力弱、促生效果不穩定等問題。本發明的方法基于耐鹽、產酸、溶磷、產IAA等能力測試，可系統評估篩選出的內生真菌促生抗逆潛力；通過構建植物?真菌共培養體系對菌株及其組合進行驗證，有利于提高篩選成功率。本發明的方法針對性強、篩選效率高，為充分開發利用逆境微生物資源提供了新的策略，在提高林木應對環境脅迫方面的應用前景廣泛。

技術領域

本發明屬于環境生物技術領域，具體涉及一種通過鹽堿地扦插枝條招募林木促生抗逆內生真菌的方法。

背景技術

圍填海工程形成了大量新生待開發土地資源，可作為重要的后備農地資源。不過，圍填海區域存在排水不暢、土壤鹽分較高而有機質含量低、沙性土壤跑水跑肥等問題。如何大規模地改良新圍墾的沿海灘涂土壤，對緩解耕地資源短缺問題，推進沿海經濟、社會與環境協調發展具有重要意義。

圍填海區域常見的土壤改良措施包括水利工程改良法、物理改良法、化學改良法和生物改良法。水利工程改良法通過圍堤和溝渠等設施構建，利用灌溉和排水等水利工程措施將區域內的鹽排出，可為圍填海區域土壤改良奠定基礎。物理與化學改良法分別通過調節土壤理化性質，可加速淋鹽、活化土壤、改善土壤結構；不過，由于成本較高，存在副作用等問題，兩種方法大多在小范圍實施，可作為圍填海區域土壤改良的輔助手段。生物改良法通過耐鹽植物種植來逐步改善土壤物理、化學性質和土壤小氣候，從而達到減少土壤水分蒸發和抑制土壤返鹽的目的。生物改良法操作簡單，成本較低，適合在圍填海區域規模化應用，具有顯著的經濟、社會和生態效益。

生物改良法的核心是耐鹽植物的選擇，而耐鹽林木作為多年生木本植物在鹽堿地改良方面具有不可替代的作用。在林木耐鹽新品種培育方面，由于林木耐鹽相關的生理及遺傳復雜性，傳統的遺傳育種改良培育耐鹽新品種的周期較長、性狀不穩；轉基因育種縮短了培育周期，然而受限于有實際應用價值的耐鹽基因數量不足，未取得重大突破。在提高現有林木品種的耐鹽性方面，從自然生態系統分離的一些真菌(叢枝菌根真菌、內生真菌等)具有促生抗逆潛力。有益真菌可通過自身的代謝產物或借助于信號轉導作用促進植物的生長發育，從而增強宿主對鹽脅迫的抵抗能力。由于叢枝菌根真菌只能在活體植物的根部寄生，無法在人工合成的培養基上進行培養，阻礙了相關開發應用；而內生真菌能在多種人工合成培養基生長，便于開展以內生真菌為核心的菌劑研發與應用。雖然基于內生真菌的植物促生菌劑已有報道，但應用于鹽堿地林木促生抗逆的較少，且外來菌株的引入是否會引發其他生態問題，施用后能否相對土著真菌形成競爭優勢尚不清楚。使用林木扦插枝條從本地招募促生抗逆內生真菌，發掘可以促進鹽脅迫條件下林木生長的內生真菌資源對生物改良法的推廣應用具有重要意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種通過鹽堿地扦插枝條招募林木促生抗逆內生真菌的方法，能充分挖掘當地內生真菌資源，因地制宜的篩選有利于提高林木抗鹽害能力的土著菌株，為新型抗逆菌劑的創制及在困難立地造林中的應用奠定理論基礎。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種通過鹽堿地扦插枝條招募林木促生抗逆內生真菌的方法，包括以下步驟：

步驟1)對海岸帶灘涂圍墾區域進行調查，選取已進行水利工程改良的圍墾區，要求已完成壟狀條田、人工湖或魚塘、溝渠開挖構筑，所述區域能利用溝渠網絡排鹽、天然雨水洗鹽；

步驟2)在壟狀條田開展調查，統計地表植物種類與組成，同時取土壤樣品帶回實驗室測定pH值、鹽度、有機物含量；

步驟3)針對不同鹽度鹽堿地開展針對化治理，具體如下：

步驟3-1)若土壤鹽度＞1.5％，選定試驗區域，先對壟狀條田土壤進行物理與化學改良，加速淋鹽，增強保墑抗旱能力，改良土壤的鹽分與養分狀況，構建先鋒鹽生植物生長環境；