[發明專利]一種仿生神經移植物及其制備方法

有效

• 申請號: 202211269678.0
• 申請日: 2022-10-18
• 公開（公告）號: CN115607732B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 顧曉松;代秀;顧興中;龔蕾蕾;李枚原;孫華林;錢天梅;王鴻奎;徐來
• 申請（專利權）人: 堯舜澤生物醫藥（南京）有限公司
• 主分類號: A61L27/20
• 分類號: A61L27/20;A61L27/36;A61L27/58;D04H1/728
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 馬進

1.一種仿生神經移植物，其特征在于，包括螺旋支架、納米纖維膜、導向纖維和hBMSC-ECM，所述納米纖維膜包覆于螺旋支架表面，所述導向纖維和hBMSC-ECM內置于螺旋支架管腔中，所述螺旋支架、納米纖維膜和導向纖維的原料均為殼聚糖。

2.根據權利要求1所述的仿生神經移植物，其特征在于，所述螺旋支架的內徑為1~6mm，長度為1~6cm，螺距為0.5~5mm。

3.根據權利要求1所述的仿生神經移植物，其特征在于，所述導向纖維的長度為1~3cm，數量為3~28根。

4.一種權利要求1~3任一項所述的仿生神經移植物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

以殼聚糖為原料，采用模具澆筑的方式制備螺旋支架；

以殼聚糖為原料，采用靜電紡絲法在螺旋支架表面包覆一層納米纖維膜，得到表面包覆納米纖維膜的螺旋管；

以殼聚糖為原料，采用模板法制備導向纖維；

在表面包覆納米纖維膜的螺旋管內部填充導向纖維和hBMSC-ECM，即得仿生神經移植物。

5.根據權利要求4所述的仿生神經移植物的制備方法，其特征在于，所述螺旋支架的制備步驟包括：

配制濃度為4wt%~7wt%的殼聚糖溶液；

將殼聚糖溶液澆注在帶有螺紋的內芯模具上；

將帶有殼聚糖溶液的內芯模具置于5~20%的NaOH溶液中固化定型，然后用水清洗、干燥、脫模，得到螺旋支架半成品；

將螺旋支架半成品浸入含5wt%甲醇的乙酸酐溶液中乙酰化6h，然后采用5~20%的NaOH溶液在室溫下固定12h，清洗晾干，即得螺旋支架。

6.根據權利要求4所述的仿生神經移植物的制備方法，其特征在于，所述表面包覆納米纖維膜的螺旋管的制備步驟包括：

配制總濃度為3wt%~5wt%的殼聚糖與聚環氧乙烷的共混溶液，其中殼聚糖與聚環氧乙烷的質量比為100：5~20；

將殼聚糖與聚環氧乙烷的共混溶液置于靜電紡絲裝置中，將螺旋支架置于管狀的接收裝置上，進行靜電紡絲，在螺旋支架表面包覆一層納米纖維膜；

將包覆納米纖維膜的螺旋支架置于5~20%的NaOH溶液中固化定型，然后用水清洗去除聚環氧乙烷，即得表面包覆納米纖維膜的螺旋管。

7.根據權利要求6所述的仿生神經移植物的制備方法，其特征在于，所述靜電紡絲的設置參數包括：電壓為5~35kV，流速為0.1~2mL/h，接收距離為5~35cm，接收裝置的轉速為5~150rmp。

8.根據權利要求4所述的仿生神經移植物的制備方法，其特征在于，所述導向纖維的制備步驟包括：

配制濃度為4wt%~7wt%的殼聚糖溶液；

將殼聚糖溶液澆注在帶有凹槽的模具中；

將帶有殼聚糖溶液的模具放入5~20%的NaOH溶液中固化定型，然后用水清洗、干燥、脫模，即得導向纖維。

9.根據權利要求8所述的仿生神經移植物的制備方法，其特征在于，所述模具的凹槽包括連通的內凹槽和外凹槽，連通的內凹槽和外凹槽的橫截面形狀為倒置的品字形，所述外凹槽的寬度為100~500μm，所述外凹槽的高度為20~50μm，所述內凹槽的寬度與外凹槽的高度相同，所述內凹槽的高度為25~240μm，所述外凹槽的寬度為兩倍內凹槽的高度與內凹槽的寬度之和，所述內凹槽和外凹槽的長度相同，均為1~3cm。

10.根據權利要求4所述的仿生神經移植物的制備方法，其特征在于，所述hBMSC-ECM的制備步驟包括：

以DPBS溶液稀釋100倍的MSC貼壁試劑包被培養皿；

將復蘇后的hBMSC種植于包被后的培養皿上，加入完全培養基，于37℃、5% CO₂培養箱中培養，每2天更換一次培養基；

待細胞飽和度達到80%時，換用含抗壞血酸的完全培養基，每2天避光換液一次，10天后棄去培養液，DPBS清洗3次以上后，以超純水在37℃下低滲10min，然后去除超純水，加入細胞裂解液反應5min，采用DPBS清洗，清洗后用DNA酶在37℃下反應2h，最后用DPBS清洗，4℃下保存。