[發明專利]一種小核糖核酸屬病毒的檢測引物和檢測方法

在審

• 申請號: 202211268287.7
• 申請日: 2022-10-17
• 公開（公告）號: CN115961093A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發明（設計）人: 莊振宏;林虹;宋衛濤;汪世華;郝嶺;吳丹丹
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

本發明具體涉及一種小核糖核酸屬病毒的檢測引物和檢測方法。所述的檢測引物為：LYJ?H?F：5’?GGTCTATGCTGTATCCAAA?3’，LYJ?H?R：5’?ATATTGTCAAGCTGGTGAG?3’；所述小核糖核酸屬病毒的全基因組序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發明中的檢測引物是基于所述小核糖核酸屬病毒基因組中特有的一段661bp的序列進行設計的。用同翅目昆蟲龍眼雞樣本和龍眼樹樹葉樣本中的所述小核糖核酸屬病毒對該對引物進行擴增效果驗證，擴增效果均較好，且具有簡單易操作、特異性高的特點。

技術領域

本發明屬于病原微生物技術領域，具體涉及一種小核糖核酸屬病毒的檢測引物和檢測方法。

背景技術

世界各地的農作物和水果等農產品都受到各種病原體的危害，包括致病真菌、細菌和病毒。在包括上述真菌和細菌在內的所有植物病原體中，病毒是導致水果質量和產量嚴重損失的主要病原體。昆蟲是攜帶和傳播農作物和水果病原體的重要媒介。同翅目昆蟲 Pyrops?candelaria也被稱為龍眼雞，龍眼雞廣泛分布于中國、印度和東南亞許多其他國家，危害多種果樹，其主要通過從果樹樹干吸取汁液來破壞龍眼、荔枝、橄欖、橙子、桑樹、芒果和柚子等作物。植食性昆蟲、病原體和植物相互作用，在長期進化過程中可能形成復雜的三角關系。因此，探索昆蟲在植物與其病原微生物相互作用中的作用是非常重要的。

小核糖核酸屬病毒 Picornavirales?lanternfly是從同翅目昆蟲龍眼雞上首次分離發現的全長序列為10861bp的新型RNA病毒。小核糖核酸屬病毒 Picornavirales?lanternfly的鑒定對于龍眼雞危害果樹的機制研究具有重要意義。而且隨著測序技術的進步，微生物研究也進入了組學時代，篩選和鑒定微生物植物病原菌是最重要的部分之一。自然界中存在很多未被我們認識和發現的新病原病毒，目前對新病原病毒的研究尚未停止，致病病原病毒的鑒定對于許多植物乃至人類都具有重要意義，應積極篩查和鑒定新的致病病原病毒。

發明內容

本發明的目的在于提供一種小核糖核酸屬新病毒的檢測引物和檢測方法。本發明所述的小核糖核酸屬新病毒為 Picornavirales?lanternfly，該病毒是從同翅目昆蟲龍眼雞中發現并鑒定得到的。本發明借助RNA-seq技術，從同翅目昆蟲龍眼雞中獲得 Picornavirales?lanternfly病毒的組裝片段，得到 Picornavirales?lanternfly病毒的基因組全長序列（SEQ?ID?NO.1）。將 Picornavirales?lanternfly病毒的基因組全長序列在NCBI上進行比對，結果發現與其最近的物種相似性低于15%，并獲得了 Picornavirales?lanternfly病毒特有的一段661bp的序列（SEQ?ID?NO.2）；因此，這一661bp的序列可作為設計鑒定 Picornavirales?lanternfly病毒的特異性引物的模板序列。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：

一種小核糖核酸屬病毒的檢測引物，所述的小核糖核酸屬病毒基因組全長序列如SEQ?ID?NO.1所示；所述引物的核苷酸序列如下所示：

LYJ-H-F：5’-GGTCTATGCTGTATCCAAA-3’，

LYJ-H-R：5’-ATATTGTCAAGCTGGTGAG-3’。