[發(fā)明專利]一種小核糖核酸屬病毒的檢測(cè)引物和檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211268287.7
• 申請(qǐng)日: 2022-10-17
• 公開（公告）號(hào): CN115961093A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莊振宏;林虹;宋衛(wèi)濤;汪世華;郝嶺;吳丹丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學(xué)俊

1.一種小核糖核酸屬病毒的檢測(cè)引物，其特征在于：所述引物的核苷酸序列如下所示：

LYJ-H-F：5’-GGTCTATGCTGTATCCAAA-3’，

LYJ-H-R：5’-ATATTGTCAAGCTGGTGAG-3’；

所述小核糖核酸屬病毒的全基因組序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小核糖核酸屬病毒的檢測(cè)引物，其特征在于：所述引物對(duì)全基因組序列如SEQ?ID?NO.1所示的小核糖核酸屬病毒擴(kuò)增出408bp的產(chǎn)物。

3.一種檢測(cè)權(quán)利要求1中所述的小核糖核酸屬病毒的方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

1）提取待測(cè)樣本的RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA；

2）以步驟1）反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA作為模板，利用權(quán)利要求1所述的引物按如下PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件對(duì)全基因組序列如SEQ?ID?NO.1所示的小核糖核酸屬病毒進(jìn)行檢測(cè)：

PCR反應(yīng)體系總體積25μL：ddH₂O?15.8μL，10×Taq?Buffer?2.5μL，25mM?MgCl_2?1.5μL，dNTP?Mix?2.0μL，LYJ-H-F?1μL，LYJ-H-R?1μL，cDNA模板?1μL，Hieff??Taq?DNAPolymerase?0.2μL；

PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1-2kb/min，30個(gè)循環(huán)；72℃終延伸5min；

3）將步驟2）得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂凝膠電泳，根據(jù)電泳后的條帶大小鑒定樣品模板中是否存在所述小核糖核酸屬病毒。