[發明專利]一種臍帶干細胞外泌體提取方法及應用在審
| 申請號： | 202211265720.1 | 申請日： | 2022-10-17 |
| 公開（公告）號： | CN115478047A | 公開（公告）日： | 2022-12-16 |
| 發明（設計）人： | 李本金;郝建華 | 申請（專利權）人： | 北京北美抗衰老醫學研究院 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775;A61K8/98;A61Q19/08 |
| 代理公司： | 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219 | 代理人： | 程宇 |
| 地址： | 102200 北京市昌平*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 臍帶 干細胞 外泌體 提取 方法 應用 | ||
1.一種臍帶干細胞外泌體提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.采用無血清培養基在恒溫無菌環境中提取外泌體原液；
S2.將外泌體原液與PEG混合后，使得PEG的濃度在1.6-2.5％之間，孵育1～3h,獲得穩定的外泌體交聯體系；
S3.加入外泌體提取液，獲得外泌體超速離心體系；
S4.將獲得的外泌體進行密度梯度離心收集，獲得高純度外泌體；
S5.冷凍儲存，對培養后的干細胞外泌體進行深低溫冷藏。
2.根據權利要求1所述的一種臍帶干細胞外泌體提取方法，其特征在于所述S1中的所述無血清培養基包括DMEM-F12培養基、血小板源性因子1-50ng/mL、堿性成纖維生長因子20-50ng/mL蘆薈抽提物10-50ng/mL人參抽提物10-50ng/mL、肉蓯蓉抽提物，10-50ng/mL。
3.根據權利要求1所述的一種臍帶干細胞外泌體提取方法，其特征在于S1具體為收集干細胞培養液上清，去除細胞碎片及雜質，獲得外泌體原液，優選在相對離心力200g～300g下離心8-10分鐘去除細胞碎片。
4.根據權利要求1所述的一種臍帶干細胞外泌體提取方法，其特征在于S2中PEG分子量在4000-6000，控制孵育溫度在2～6℃。
5.根據權利要求1所述的一種臍帶干細胞外泌體提取方法，其特征在于S3具體為加入45％wt的蔗糖溶液直到外泌體超速離心體系中蔗糖質量分數為10-15％。
6.根據權利要求1所述的一種臍帶干細胞外泌體提取方法，其特征在于S4離心條件2-6℃、110000g低溫離心1-2h。
7.根據權利要求1所述的一種臍帶干細胞外泌體提取方法，其特征在于S5冷凍儲存時，需要在-80℃的環境下對所提取的干細胞外泌體進行保存。
8.權利要求1-7任一項所述的方法提取的臍帶干細胞外泌體在美容制劑中的應用。
9.一種抗衰老美容產品，其特征在于：包括權利要求1-7任一項所述的方法提取的臍帶干細胞外泌體。
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