[發明專利]一種用于靶向治療腫瘤的重組融合蛋白及其制備方法在審
| 申請號： | 202211259846.8 | 申請日： | 2022-10-14 |
| 公開（公告）號： | CN115850512A | 公開（公告）日： | 2023-03-28 |
| 發明（設計）人： | 生秀梅;王均潔;高迪;張涵;崔璨 | 申請（專利權）人： | 江蘇大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K47/64;A61K38/16;A61P35/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京智造力知識產權代理有限公司 32382 | 代理人： | 朱旭 |
| 地址： | 212013 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 靶向 治療 腫瘤 重組 融合 蛋白 及其 制備 方法 | ||
1.一種靶向治療腫瘤的重組融合蛋白，其特征在于，所述的重組融合蛋白為TAT-GLIPR1，是由蛋白傳導域修飾GLIPR-1形成的融合蛋白，其氨基酸序列如Seq_1所示。
2.根據權利要求1所述的重組融合蛋白，其特征在于，TAT-GLIPR1中含有如Seq_3所示的蛋白傳導域序列，以及如Seq_4所示的TAT編碼基因。
3.根據權利要求1所述的重組融合蛋白，其特征在于，所述重組融合蛋白TAT-GLIPR1具有如Seq_2所示的編碼基因核苷酸序列。
4.一種重組融合蛋白TAT-GLIPR1的制備方法，所述方法包括步驟有：
（1）以含有GLIPR1基因的cDNA克隆質粒pLX304-GLIPR1為模板，設計特異性引物序列，通過PCR擴增編碼獲得重組融合蛋白TAT-GLIPR1的基因片段；
（2）將基因片段雙酶切后與表達載體pET-15b連接，形成重組表達載體pET-15b-
（3）將步驟（2）獲得的重組表達載體pET-15b-
（4）對陽性宿主菌進行鑒定，于宿主細胞中擴大培養并誘導表達重組蛋白，收集表達產物，破碎、離心、變性、復性、純化獲得到重組融合蛋白TAT-GLIPR1。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的特異性引物序列的上、下游引物的5’端分別加上Nde I和BamHⅠ酶切位點序列，所述上游引物序列含TAT序列。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的特異性引物序列的上游引物序列如Seq_5所示，下游引物序列如Seq_6所示。
7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述的雙酶切為用Nde I和BamHⅠ進行雙酶切。
8.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中所述的宿主細胞為E. ColiBL21(DE3) Codon Plus。
9.權利要求1所述的重組融合蛋白TAT-GLIPR1在制備治療癌癥的靶向藥物中的應用。
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