[發明專利]一種擬南芥葉片樣本組織解離液及解離方法在審
| 申請號： | 202211257502.3 | 申請日： | 2022-10-14 |
| 公開（公告）號： | CN115584338A | 公開（公告）日： | 2023-01-10 |
| 發明（設計）人： | 王翠亭;張倩;張志明;肖云平 | 申請（專利權）人： | 上海歐易生物醫學科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) 32266 | 代理人： | 劉召民 |
| 地址： | 201114 上海市閔行*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 擬南芥 葉片 樣本 組織 解離 方法 | ||
1.一種擬南芥葉片樣本組織解離液，所述組織解離液是在8％-10％甘露醇溶液中添加1％-3％纖維素酶、1％-3％果膠酶。
2.根據權利要求1所述的一種擬南芥葉片樣本組織解離液，其特征在于，所述組織解離液是添加有2％纖維素酶、2％果膠酶的8％甘露醇溶液。
3.一種擬南芥葉片樣本的解離方法，包括：
(1)表面清洗：將擬南芥葉片樣本用甘露醇溶液進行表面清洗；
(2)樣本剪碎：將步驟(1)清洗后的葉片置于無菌培養皿中，加入甘露醇溶液浸沒過葉片、將葉片切成細條狀；
(3)酶解消化：將步驟(2)得到的葉片細條轉移至組織解離液中酶解得到原生質體，所述組織解離液是添加有1％-3％纖維素酶、1％-3％果膠酶的8％-10％甘露醇溶液；
(4)篩網過濾：將步驟(3)消化后的懸液置于碎冰上，然后篩網過濾、離心富集、棄消化液；
(5)去雜洗滌：向步驟(4)得到的原生質體沉淀中加入甘露醇溶液離心洗滌；
(6)細胞重懸：向步驟(5)離心后的細胞沉淀中加入甘露醇溶液進行重懸。
4.根據權利要求3所述的一種擬南芥葉片樣本的解離方法，其特征在于，步驟(1)中，從擬南芥植株中取2-3cm長的葉片2-3片，用甘露醇溶液進行表面清洗2-3次，每次2-3min。
5.根據權利要求3所述的一種擬南芥葉片樣本的解離方法，其特征在于，步驟(3)中，酶解溫度為室溫，酶解時間為4-5h。
6.根據權利要求3或5所述的一種擬南芥葉片樣本的解離方法，其特征在于，步驟(3)中，酶解在轉速10-15rpm的雜交爐中進行。
7.根據權利要求3所述的一種擬南芥葉片樣本的解離方法，其特征在于，步驟(4)中，先使用70μm篩網過濾，再使用30μm篩網過濾。
8.根據權利要求3所述的一種擬南芥葉片樣本的解離方法，其特征在于，步驟(4)和(5)中，離心條件均為：離心力100g，離心溫度4-10℃，離心時間2-5min。
9.根據權利要求3所述的一種擬南芥葉片樣本的解離方法，其特征在于，步驟(6)中，所述重懸的具體步驟為棄上清后留50μl，加入1ml 8％甘露醇溶液，用寬口的膠頭滴管輕柔吹打混勻。
10.根據權利要求3所述的一種擬南芥葉片樣本的解離方法，其特征在于，步驟(1)、(2)、(5)和(6)中，使用的甘露醇溶液的質量體積濃度均為8％。
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