[發明專利]一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的制備

有效

• 申請號: 202211255743.4
• 申請日: 2022-10-13
• 公開（公告）號: CN115521324B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 郭麗霞;劉文;田亞飛;李錦瑤;任國棟;馬素芳;張承武;李麗紅;刁海鵬;王浩江;王斌;閆麗麗
• 申請（專利權）人: 山西醫科大學
• 主分類號: C07D501/30
• 分類號: C07D501/30;C07D501/04;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 王芳

1.一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針，其特征在于，其結構式為：

2.根據權利要求1所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)、將2,3,3-三甲基-3H-吲哚和3-溴丙酸在無溶劑的條件下攪拌反應，反應結束后，冷卻，反應物用二氯甲烷超聲溶解，之后用溶劑沉淀，重復三次，得到白色沉淀1-(2-羧乙基)-2,3,3-三甲基-3H-吲哚；

2)、將1-(2-羧乙基)-2,3,3-三甲基-3H-吲哚、(E)-2氯-3-(羥亞甲基)環己烯-1-甲醛和無水乙酸鈉加入醋酸酐攪拌反應，反應結束后，減壓濃縮，然后倒入蒸餾水中，用二氯甲烷萃取，收集下層有機相，減壓濃縮，粗產物經硅膠柱層析純化，得到綠色固體1-(2-羧乙基)-2-((E)-2-(E)-3-(2-(E)-1-(2-羧乙基)-3,3-二甲基-2-亞甲基)亞乙烯)-2-氯環己基-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-3H-吲哚；

3)、在N₂保護下，將3-羥基苯硫酚、碳酸鉀和有機溶劑在50℃下攪拌30min，隨后加入含有1-(2-羧乙基)-2-((E)-2-(E)-3-(2-(E)-1-(2-羧乙基)-3,3-二甲基-2-亞甲基)亞乙烯)-2-氯環己基-1-烯-1-基)乙烯基)-3,3-二甲基-3H-吲哚的乙腈，所得混合溶液在55℃下攪拌3h，減壓濃縮，粗產物經硅膠柱層析純化，得到藍色固體(E)-1-(2-羧基乙基)-2-(2-(6-羥基-2,3-二氫-1H-硫雜蒽-4-基)乙烯基)-3,3-二甲基-3H-吲哚；

4)、將(E)-1-(2-羧基乙基)-2-(2-(6-羥基-2,3-二氫-1H-硫雜蒽-4-基)乙烯基)-3,3-二甲基-3H-吲哚和縮合劑加入DMF溶解，室溫下攪拌20min，然后滴加含有7-苯乙酰氨基-3-氯甲基-4-頭孢烷酸對甲氧基芐酯的DMF溶液，繼續攪拌30min，減壓濃縮，粗產物經硅膠柱層析純化，得到藍色固體化合物，隨后將藍色固體化合物溶于苯甲醚、三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶液中，在0℃下攪拌1h，減壓濃縮，粗產物經硅膠柱層析純化，得到藍色固體2-((E)-2-(((7S)-2-羧基-8-氧基-7-(2-苯乙酰胺)-5-硫-1-氮雜環[4.2.0]辛-2-烯-3-基)甲氧基)-2,3-二氫-1H-硫雜蒽-4-基)乙烯基)-1-(2-羧乙基)-3,3-二甲基-3H-吲哚-1-銨，即熒光探針。

3.根據權利要求2所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述反應的溫度為90℃，反應的時間為60min；步驟2)中所述反應的條件是在室溫下反應6h。

4.根據權利要求2所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述的1-(2-羧乙基)-2,3,3-三甲基-3H-吲哚、(E)-2氯-3-(羥亞甲基)環己烯-1-甲醛和無水乙酸鈉的摩爾比為2:1:3。

5.根據權利要求2所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟2)、3)中所述的硅膠柱層析是體積比為20:1的二氯甲烷與甲醇的混合物；步驟4)中所述的硅膠柱層析是體積比為25:1或2:1的二氯甲烷與甲醇的混合物。

6.根據權利要求2所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述的溶劑為乙酸乙酯；步驟3)中所述的有機溶劑為乙腈或DMF；步驟4)中所述的縮合劑為Cs₂CO₃。

7.根據權利要求2所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟4)中所述的苯甲醚、三氟乙酸和二氯甲烷的體積比為1:4:20。

8.根據權利要求1所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針的應用，其特征在于，所述探針用于制備耐藥菌的檢測試劑。

9.根據權利要求1所述的一種檢測耐藥菌中β-內酰胺酶的近紅外熒光探針在制備試劑盒中的應用，其特征在于，所述試劑盒用于耐藥菌的篩選。