[發(fā)明專利]一種糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒及核酸提取方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211248669.3
• 申請(qǐng)日: 2022-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN115537417A
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史歷歷;孫玉璽;李凡璐;李三華;齊華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南賽諾特生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發(fā)明涉及一種糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒及核酸提取方法，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種可簡單、快速提取人類糞便脫落細(xì)胞核酸的提取試劑盒，包括以下成分：糞便保存液、裂解液、洗滌液1、洗滌液2和磁珠。采用本發(fā)明公開的糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取試用劑盒及核酸提取方法，在保證得到DNA質(zhì)量的同時(shí)，簡化了操作步驟，縮短了操作時(shí)間，市場應(yīng)用前景廣闊，對(duì)糞便腸道脫落細(xì)胞核酸自動(dòng)化提取流程的研發(fā)具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒及核酸提取方法，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

糞便自腸道形成，在排出體外的過程中會(huì)帶有很多腸道脫落細(xì)胞，正常人每克糞便樣本中存在約10⁶腸道脫落細(xì)胞，而結(jié)直腸癌患者其脫落細(xì)胞更多。因此對(duì)糞便進(jìn)行腸道脫落細(xì)胞DNA提取，提取得到的DNA進(jìn)行相關(guān)marker的檢測可預(yù)示人體健康狀況，如是否有患結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)。DNA檢測方法很多，但是檢測的準(zhǔn)確度與糞便的采集及提取方法息息相關(guān)。從糞便中有效提取DNA是進(jìn)行下游檢測的基礎(chǔ)，只有得到高質(zhì)量的糞便腸道脫落細(xì)胞DNA才能確保后續(xù)的檢測實(shí)驗(yàn)。但是糞便成分復(fù)雜，里面除了含有腸道脫落細(xì)胞外，還有腐殖酸、微生物、蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、脂肪及未消化的食物纖維，從如此復(fù)雜的成分里提取得到腸道脫落細(xì)胞DNA并不容易。

目前市場上常用糞便脫落細(xì)胞核酸試劑盒和提取方法，提取得到的DNA質(zhì)量參差不齊，其中一些組分偏粘稠在操作的過程中，極易黏附于槍頭上。而且把DNA從磁珠洗脫的過程中，不易洗脫。提取組分偏粘稠造成在提取過程中大大拉長提取時(shí)間，不易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化提取。因?yàn)檫@樣的組分會(huì)造成，最后一步洗脫DNA的時(shí)候，會(huì)有大量磁珠殘留，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，使用該試劑盒可以簡單、快速地從糞便中提取腸道脫落細(xì)胞的DNA。

本發(fā)明還提供了使用該糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒的核酸提取方法，操作簡便，節(jié)省時(shí)間，對(duì)糞便糞便腸道脫落細(xì)胞核酸自動(dòng)化提取流程的研發(fā)具有重要意義。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，包括以下成分：糞便保存液、裂解液、洗滌液1、洗滌液2和磁珠；糞便保存液包括如下工作濃度的組分：1-5M硫氰酸胍、0.05-0.1MTris-HCl、0.15M NaCl、2-10mM EDTA、0.1-1％ TritonX-100、0.1％-1％ Tween-20。

該糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒在保證提取得到的DNA質(zhì)量的同時(shí)，對(duì)一些組分進(jìn)行了調(diào)整，提取流程中各組分都不粘稠，這樣就保證了實(shí)驗(yàn)流程的順暢，不會(huì)出現(xiàn)溶液黏附于槍頭，不易吹打的現(xiàn)象。在進(jìn)行人工提取時(shí)，便于操作，節(jié)約時(shí)間。

優(yōu)選地，所述的糞便保存液的pH為7.5±0.5。

優(yōu)選地，所述的裂解液包括如下工作濃度的組分：5％-10％ SDS、2-4mM EDTA。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的裂解液的pH為7.50±0.50。

優(yōu)選地，所述的洗滌液1包括如下工作濃度的組分：60％-80％(v/v)乙醇、0.05MTris-HCl、0.15M NaCl。

具體地，60％-80％(v/v)乙醇可以在使用前加入。

優(yōu)選地，所述的洗滌液2包括如下工作濃度的組分：0.05-0.1M Tris-HCl、60-70％(v/v)乙醇。

具體地，60-70％(v/v)乙醇可以在使用前加入。

一種采用糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒的核酸提取方法，具體操作步驟如下：

步驟1)糞便樣本保存在糞便保存液中，離心取上清于潔凈離心管中；