[發(fā)明專利]一種糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒及核酸提取方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211248669.3
• 申請(qǐng)日: 2022-10-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115537417A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史歷歷;孫玉璽;李凡璐;李三華;齊華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南賽諾特生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛(ài)周

1.一種糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒包括以下成分：糞便保存液、裂解液、洗滌液1、洗滌液2和磁珠；所述的糞便保存液包括如下工作濃度的組分：1-5M硫氰酸胍、0.05-0.1M Tris-HCl、0.15M NaCl、2-10mM EDTA、0.1-1％TritonX-100、0.1％-1％Tween-20。

2.如權(quán)利要求1所述的糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，其特征在于：所述的糞便保存液的pH為7.5±0.50。

3.如權(quán)利要求1所述的糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，其特征在于：所述的裂解液包括如下工作濃度的組分：5％-10％SDS、2-4mM EDTA。

4.如權(quán)利要求3所述的糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，其特征在于：所述的裂解液的pH為7.50±0.50。

5.如權(quán)利要求1所述的糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，其特征在于：所述的洗滌液1包括如下工作濃度的組分：60％-80％(v/v)乙醇、0.05M Tris-HCl、0.15M NaCl。

6.如權(quán)利要求1所述的糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒，其特征在于：所述的洗滌液2包括如下工作濃度的組分：0.05-0.1M Tris-HCl、60-70％(v/v)乙醇。

7.一種采用如權(quán)利要求1所述的糞便腸道脫落細(xì)胞核酸提取用試劑盒的核酸提取方法，其特征在于：具體操作方法如下：

步驟1)糞便樣本保存在糞便保存液中，離心取上清于潔凈離心管中；

步驟2)向上清液中加入裂解液、磁珠，混勻后70-90℃孵育8～12min；

步驟3)將離心管震蕩混勻，冷卻至室溫后，置于磁力架上吸附1～2min，棄去上清；

步驟4)向離心管中加入洗滌液1，混勻后置于磁力架上吸附1～2min，棄去上清；

步驟5)向離心管中加入洗滌液2，混勻后置于磁力架上吸附1～2min，棄去上清；

步驟6)重復(fù)步驟5)；

步驟7)向離心管中加入無(wú)水乙醇，將磁珠-乙醇混合物轉(zhuǎn)移至新的潔凈離心管中，置于磁力架上吸附1～2min，棄去上清；

步驟8)室溫干燥數(shù)分鐘，加入H₂O震蕩洗脫；

步驟9)將離心管置于磁力架上吸附1～2min，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，此上清即為提取獲得的基因組DNA。

8.如權(quán)利要求7所述的核酸提取方法，其特征在于：步驟1)中每1g糞便樣本加入10ml糞便保存液。

9.如權(quán)利要求7所述的核酸提取方法，其特征在于：步驟2)中每5ml上清液加入3ml裂解液和50μl磁珠。