[發明專利]一種結核分枝桿菌分泌蛋白LprA單克隆抗體及其應用

在審

• 申請號: 202211239158.5
• 申請日: 2022-10-11
• 公開（公告）號: CN115873805A
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 黃海榮;于霞;杜建;李成海;朱芮;張洪靜;董玲玲
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京胸科醫院;北京市結核病胸部腫瘤研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/12;C07K14/35;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 董函竹

本發明公開了一種結核分枝桿菌分泌蛋白LprA單克隆抗體及其應用。具體地公開了雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株為小鼠雜交瘤細胞ZYS?CS?01，所述小鼠雜交瘤細胞ZYS?CS?01分泌特異性結合LprA蛋白的單克隆抗體，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC No.18884。本發明還公開了由所述雜交瘤細胞株分泌產生的單克隆抗體。本發明首次發現LprA是一種潛在的分枝桿菌菌種鑒定的分泌蛋白，并利用LprA蛋白作為抗原制備了針對LprA蛋白的單克隆抗體并進一步建立了基于LprA的雙抗夾心ELISA法對分枝桿菌陽性培養液進行菌種鑒定，實現對NTM的快速鑒定。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種結核分枝桿菌分泌蛋白LprA單克隆抗體及其應用。

背景技術

結核病(Tuberculosis，TB)是結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的慢性傳染病，是單一傳染源的頭號死亡原因，也是全球第13大死因。據WHO估算，全球結核病潛伏感染人群已將近20億。2020年，全球新增結核病患者987萬。

非結核分枝桿菌(Non-tuberculous Mycobacteria，NTM)是指分枝桿菌屬中除結核分枝桿菌復合群(Mycobacterium tuberculosis complex，MTC)和麻風分枝桿菌(Mycobacterium leprae)以外的其他分枝桿菌的總稱，也稱為環境分枝桿菌。非結核分枝桿菌病(NTM病)是指因感染了NTM，并引起相關組織或器官病變的疾病。NTM是環境致病菌，在世界各地都普遍存在，以土壤和水中最為常見，水源性NTM與人類感染的關系最為密切。依照流行病學發展規律，隨著TB在一個國家或地區控制程度的不斷提高，NTM病在分枝桿菌相關疾病中所占的比例將逐步提高。近年來，NTM病呈快速增多趨勢，已成為威脅人類健康的重要公共衛生問題之一。

NTM病診斷困難重重，實驗室診斷技術突破是關鍵。NTM病的存在和發病率的逐步提高，增加了結核病控制的難度和復雜性。NTM病的臨床癥狀和病理變化、影像學特點與TB有很多相似性，二者通常難以鑒別，一直處于被低估甚至忽視的狀態。臨床醫生常依據涂片“抗酸桿菌陽性”即診斷為結核病，忽略了針對NTM病的鑒別診斷。我國東南沿海地區15％-20％涂片陽性的“結核病”患者在后續被鑒定為NTM病。不僅如此，由于絕大多數NTM菌種對常用抗結核藥物天然耐藥，臨床易于將NTM病誤診為“耐藥結核病”。盡管存在上述諸多問題，國內外用于分枝桿菌菌種鑒定的技術非常匱乏，且現有技術均依賴于標本中細菌的存在。有些技術要求先培養獲得細菌后方可鑒定，因此非常耗時，快生長分枝桿菌(Rapidlygrowing Mycobacteria，RGM)需要至少一周，而慢生長分枝桿菌(Slowly growingMycobacteria，SGM)則需要1-2個月。對于標本中未發現細菌的“菌陰”患者，目前還沒有技術能夠實現結核病與NTM病的鑒別診斷，更不可能進行分枝桿菌的菌種鑒定。在臨床實踐中，沒有開展菌種鑒定，或是在等待鑒定結果期間，以及菌陰的NTM病患者，多數情況下會被當作TB處理，接受無效的抗結核方案治療。

因此，研究和開發特異性更高、快速、可鑒別區分NTM病和結核病的鑒別診斷方法，對于NTM疾病的篩查、診斷、治療，以及對結核病控制、避免NTM對結核病診斷的干擾都具有重要的意義和廣泛的應用前景。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何鑒定結核分枝桿菌和/或非結核分枝桿菌、鑒別區分非結核分枝桿菌和結核分枝桿菌和/或檢測LprA蛋白。所要解決的技術問題不限于所描述的技術主題，本領域技術人員通過以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技術主題。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株為小鼠雜交瘤細胞ZYS-CS-01，所述小鼠雜交瘤細胞ZYS-CS-01分泌特異性結合LprA蛋白的單克隆抗體，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCCNo.18884。