[發明專利]一種基于光電雙信號的諾如病毒的檢測方法、材料及應用

有效

• 申請號: 202211229352.5
• 申請日: 2022-10-08
• 公開（公告）號: CN115524489B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 李燦鵬;趙卉;寧國寶;肖淋
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/535;G01N21/31;G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 昆明盛鼎宏圖知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53203
• 代理人: 王輝

本發明提供了一種基于光電雙信號的諾如病毒的檢測方法、材料及應用，所述的檢測材料為CuOsubgt;2/subgt;@NHsubgt;2/subgt;COF，使用該材料檢測諾如病毒的方法包括，1)與NoV親和肽結合；2)催化2,4?二氯苯酚2,4?DP和4?氨基安替比林4?AP反應顯色；3)在電化學檢測中，顯現出Cu的信號。該生物傳感器具有設備簡單、無需專業人員操作、無需其他信號標簽、低成本、靈敏度較高、可視化檢測、耗時較短、較寬的檢測范圍和較低的檢出限等優點。對諾如病毒的檢測具有重要的科學意義和臨床應用價值，同時也為諾如病毒的實際樣品檢測提供新的思路。

技術領域

本發明屬于分析化學、材料和生物傳感技術領域，具體涉及一種諾如病毒的光電雙模式檢測方法、免疫分析和生物傳感技術領域，具體是NoV作為目標分析物，采用CuO₂@NH₂COF的復合材料標記親和肽來構建出一種夾心型免疫傳感器。

背景技術

諾如病毒，又稱諾瓦克病毒(Norwalk?Viruses,NV)是人類杯狀病毒科(HumanCalicivirus,HuCV)中諾如病毒(Norovirus,NV)屬的一種病毒。是一組形態相似、抗原性略有不同的病毒顆粒。諾如病毒為無包膜單股正鏈RNA病毒，病毒粒子直徑約27-40nm，基因組全長約7.5-7.7kb，分為三個開放閱讀框(Open?Reading?Frames,ORFs)，兩端是5'和3'非翻譯區(Untranslated?region,UTR)，3'末端有多聚腺苷酸尾(PolyA)。ORF1編碼一個聚蛋白，翻譯后被裂解為與復制相關的7個非結構蛋白(Non-structural?polyprotein)，其中包括RNA依賴的RNA聚合酶(RNA?dependent?RNA?polymerase,RdRp)。ORF2和ORF3分別編碼主要結構蛋白(VP1)和次要結構蛋白(VP2)。病毒衣殼由180個VP1和幾個VP2分子構成，180個衣殼蛋白首先構成90個二聚體，然后形成二十面體對稱的病毒粒子。根據蛋白在衣殼中的位置，每個衣殼蛋白可分為兩個主要區域，分別為殼區(Shell?domain，S區)和突出區(Protruding?domain，P區)，二者之間是由8個氨基酸組成的鉸鏈區(Hinge)連接。S區由衣殼蛋白的前225個氨基酸組成，形成病毒內殼，圍繞病毒RNA。P區由剩余的氨基酸組成，進一步分為兩個亞區P1區和P2區。P區通過二聚體相互作用增加衣殼穩定性并形成電鏡下可見的病毒粒子突出端。P2區高度變異，包含潛在的抗原中和位點和受體組織血型抗原(histoblood?group?antigens,HBGAs)識別位點。VP2位于病毒粒子內部，被認為參與衣殼聚集。諾如病毒分5個基因組(GI～GV)，其中只有GI、GII和GIV可以感染人，而GIII、GV分別感染牛和鼠。我國目前最常見的諾如病毒為GII、GI型。GII型含有至少21個基因亞型，毒株變異較快，其中GII.4基因亞型近10年已引起3次全球性流行，分別由2006年GII.4－2006Minerva變異株、2009年GII.4－2009?New?Orleans變異株和GII.4－2012?Sydney變異株所致，成為全球重要的公共衛生問題之一。