[發明專利]一種基于光電雙信號的諾如病毒的檢測方法、材料及應用

有效

• 申請號: 202211229352.5
• 申請日: 2022-10-08
• 公開（公告）號: CN115524489B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 李燦鵬;趙卉;寧國寶;肖淋
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/535;G01N21/31;G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 昆明盛鼎宏圖知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53203
• 代理人: 王輝

1.一種非診斷目的的基于光電雙信號的諾如病毒的檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括如下步驟，

步驟1)將Ab1滴加到96孔板中，并在冰箱中孵育過夜，然后用PBS溶液洗去未結合的Ab1；

步驟2)將牛血白清蛋白添加到步驟1)處理好的孔板中，在室溫下封閉0-90min；封閉結束后，然后用PBS溶液清洗孔板；

步驟3)在步驟2)處理好的孔板中加入不同濃度的NoV，在室溫下孵育0-120min，然后用然后用PBS溶液清洗96孔板；

步驟4)在步驟3)處理好的孔板中加入1-5mg·mL^-1Pep/CuO₂@NH₂?COF生物探針材料，并在室溫下孵育0-150min，并將未結合的生物探針用PBS溶液去除；

步驟5)分別將2,4-DP和4-AP滴加到步驟4)處理好的板中，室溫下反應0-150min，用紫外分光光度計測量其在510nm處的吸光度值；

步驟6)將基底材料AuPt-PDA滴加到打磨好的玻碳電極上，室溫下干燥，隨后加入Ab1滴加到干燥好的電極上，于4℃孵育過夜；

步驟7)用PBS溶液洗去未結合的Ab1，將1-3％的牛血白清蛋白滴加到上述玻碳電極上，室溫下封閉0-60min，封閉結束，用PBS溶液洗去未結合的牛血白清蛋白；

步驟8)在步驟7)處理好的玻碳電極上加入不同濃度的NoV，并在室溫下孵育0-90min，孵育結束，用PBS溶液洗去未結合的NoV；

步驟9)在步驟8)處理好的玻碳電極上加入1-5mg·mL^-1Pep/CuO₂@NH₂COF生物探針，并在室溫下孵育0-150min，孵育結束，用PBS溶液洗去未結合的NoV；

步驟10)以步驟9)處理好的玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，在濃度為0.1M的pH＝4.0的醋酸緩沖液中，利用差分脈沖伏安法進行檢測，掃描電壓為-0.2-0.2V，脈沖振幅為0.05V，脈沖寬度為0.05s，脈沖周期為0.5s，記錄電流峰值；

上述的Pep為NoV親和性肽。

2.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的基于光電雙信號的諾如病毒的檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括的步驟具體為，

步驟1)將50μL的1-10μg·mL^-1Ab1滴加到96孔板中，并在冰箱中孵育過夜，然后用含0.01％-2％吐溫-20的PBS溶液洗去未結合的Ab1；

步驟2)將50μL?0.1-5％的牛血白清蛋白添加到步驟1)處理好的孔板中，在室溫下封閉0-90min；封閉結束后，然后用含0.01％-2％吐溫-20的PBS溶液清洗孔板；

步驟3)在步驟2)處理好的孔板中加入50μL不同濃度的NoV，在室溫下孵育0-120min，然后用然后用含0.01％-2％吐溫-20的PBS溶液清洗96孔板；

步驟4)在步驟3)處理好的孔板中加入50μL的1-5mg·mL^-1Pep/CuO₂@NH₂?COF生物探針材料，并在室溫下孵育0-150min，并將未結合的生物探針用0.01％-2％吐溫-20的PBS溶液去除；

步驟5)分別將50μL的1-5mg·mL^-1的2,4-DP和50μL的1-5mg·mL^-14-AP滴加到步驟4)處理好的板中，室溫下反應0-150min，用紫外分光光度計測量其在510nm處的吸光度值；

步驟6)將10μL的1-5mg·mL^-1的基底材料AuPt-PDA滴加到打磨好的玻碳電極上，室溫下干燥，隨后加入10μL的1-10μg·mL^-1Ab1滴加到干燥好的電極上，于4℃孵育過夜；

步驟7)用PBS溶液洗去未結合的Ab1，將10μL的1-3％的牛血白清蛋白滴加到上述玻碳電極上，室溫下封閉0-60min，封閉結束，用PBS溶液洗去未結合的牛血白清蛋白；

步驟8)在步驟7)處理好的玻碳電極上加入10μL不同濃度的NoV，并在室溫下孵育0-90min，孵育結束，用PBS溶液洗去未結合的NoV；

步驟9)在步驟8)處理好的玻碳電極上加入10μL?1-5mg·mL^-1的Pep/CuO₂@NH₂?COF生物探針，并在室溫下孵育0-150min，孵育結束，用PBS溶液洗去未結合的NoV；

步驟10)以步驟9)處理好的玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，在10mL濃度為0.1M的pH＝4.0的醋酸緩沖液中，利用差分脈沖伏安法進行檢測，掃描電壓為-0.2-0.2V，脈沖振幅為0.05V，脈沖寬度為0.05s，脈沖周期為0.5s，記錄電流峰值。