[發(fā)明專利]一種紅曲發(fā)酵夏秋茶擴大培養(yǎng)發(fā)酵方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211222860.0
• 申請日: 2022-10-08
• 公開（公告）號: CN115651884A
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賀圣凌;宋詩穎;周羅娜;趙興麗;羅林麗;林雨蝶;孫靜婷
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州省生物技術(shù)研究所（貴州省生物技術(shù)重點實驗室;貴州省馬鈴薯研究所;貴州省食品加工研究所）
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/14;C12N3/00;A23F3/10;A23F3/16;A23F3/20;C12R1/66
• 代理公司: 重慶一葉知秋專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50277
• 代理人: 楊娟娟

1.一種紅曲發(fā)酵夏秋茶擴大培養(yǎng)發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、種子液的制備：準確稱取夏秋茶毛茶5g于茶壺中，2000mL蒸餾水煮沸3分鐘，過濾，稀釋2倍即得備用茶汁；以茶汁為基礎(chǔ)溶液，按1.141g/50mL茶汁的蔗糖、0.712g/50mL茶汁的蛋白胨、0.048g/50mL茶汁的硫酸鎂配制種子液，并于121℃高壓滅菌20min，得到種子液；

步驟二、孢子懸浮液的制備：從活化好的紅色紅曲霉平板中刮取一環(huán)菌體于PDA培養(yǎng)皿中培養(yǎng)7天，用7mm打孔器從活化好的紅色紅曲霉平板中打三個菌餅于無菌PDA培養(yǎng)皿中，倒置培養(yǎng)5天，再使用30mL無菌水刮洗菌體，過濾于無菌三角瓶中，得到孢子懸浮液；

步驟三、種子液擴大培養(yǎng)：取150mL三角瓶，裝入種子液，調(diào)整pH，接入孢子懸浮液，分別放入搖床中，于180r/min搖瓶培養(yǎng)，測其色價和菌體干重；

步驟四、固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)：準確稱取10g夏秋茶毛茶于240mL組培瓶中，按適當含水量加入3％蔗糖水，100℃滅菌，接入種子液，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，測其色價。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅曲發(fā)酵夏秋茶擴大培養(yǎng)發(fā)酵方法，其特征在于，所述紅色紅曲霉的保藏編號為CGMCC No.3.15746。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅曲發(fā)酵夏秋茶擴大培養(yǎng)發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟二中，使用無菌水刮洗菌體，過濾于無菌三角瓶中后，使用血球計數(shù)板計數(shù)，確保孢子濃度達10⁶cfu/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅曲發(fā)酵夏秋茶擴大培養(yǎng)發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟三中種子液擴大培養(yǎng)，以搖床溫度、接種量、初始pH、裝液量及培養(yǎng)時間為單因素，以菌體干重及色價為指標分析各因素對種子液擴大培養(yǎng)的影響，確定因素及水平，篩選出較優(yōu)種子液擴大培養(yǎng)條件：溫度28℃、接種量4％、初始pH值5、裝液量50mL、發(fā)酵時間8天。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅曲發(fā)酵夏秋茶擴大培養(yǎng)發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟四中固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，以含水量、發(fā)酵溫度、接種量和培養(yǎng)時間為單因素，以色價為指標分析各因素對固態(tài)發(fā)酵的影響，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，通過Box-Benhnken的中心組合試驗設(shè)計原理，以紅曲發(fā)酵夏秋茶色價為響應面值，對發(fā)酵條件進行優(yōu)化，篩選出最優(yōu)固態(tài)發(fā)酵條件：培養(yǎng)時間7.163d、接種量34.230％、溫度28.889℃、含水量42.383％。