[發明專利]白花前胡不定芽的繁殖方法

有效

• 申請號: 202211222730.7
• 申請日: 2022-10-08
• 公開（公告）號: CN115380830B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 毛碧增;錢亦純;沙浩東
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明涉及一種白花前胡不定芽的繁殖方法，依次包括以下步驟：外植體滅菌，得莖尖外植體；將莖尖外植體接種到擴繁培養基中培養，直至在外植體上誘導出長度≥0.5cm且個數≥5個的不定芽才結束培養；將不定芽分割成單芽；將單芽轉接到生根培養基中培養，直至獲得根數≥5根且株高≥3.0cm的生根后白花前胡無菌組培苗；將生根后白花前胡無菌組培苗放入水培瓶內進行水培養。本發明的方法外植體滅菌效果好、成活率高，不定芽誘導率高、生長狀態好，組培苗生根率高，移栽成活率高。

技術領域

本發明涉及一種白花前胡不定芽的繁殖方法。

背景技術

白花前胡(Peucedanum?praeruptorum?Dunn)具有抗心肌缺血、保護心肌、改善心臟功能、降血壓、抗氧化、祛痰、抗菌、抗腫瘤等藥理作用。其主產于浙江、四川等地，但由于連年采挖，野生資源逐漸枯竭，目前人工栽培的白花前胡，存在制種不純、品質不穩定的問題。而種子繁殖萌發率較低，出苗不整齊，生長周期長，存在變異可能，影響藥效，限制了白花前胡的可持續發展。

因此，提高白花前胡的繁殖效率是保護白花前胡資源、解決市場供需需要的關鍵技術。吳沿勝等研究確定了白花前胡根、莖、葉愈傷組織誘導的條件，但基于愈傷組織建立的再生體系容易發生變異，導致藥效成分不穩定，因此本發明提出基于不定芽誘導的白花前胡再生體系，可以有效規?；峁┻z傳背景一致的優質白花前胡種苗，保障了白花前胡藥效成分穩定，為白花前胡藥材的科學應用提供了技術支撐。

目前尚未有傘形科植物利用誘導不定芽繁殖的。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種白花前胡不定芽的繁殖方法。

為解決上述技術問題，本發明提供一種白花前胡不定芽的繁殖方法，包括以下步驟：

1)、外植體滅菌：

選擇長勢良好(葉色深綠、植株健壯、無病蟲害)的白花前胡植株，首先流水清洗植株，然后切取植株莖尖(約0.5～1cm³的方塊)作為外植體材料；

將外植體材料消毒后，用無菌濾紙吸干外植體材料表面水分，用無菌手術刀修整，從而將莖尖外層變色的組織切除(升汞消毒后會導致外層組織變褐色，不切去會影響內層活細胞吸收營養)；得莖尖外植體；

2)、無菌苗培養：

將步驟1)得到的莖尖外植體接種到擴繁培養基中，在植物組織培養室內于24±1℃培養，直至在外植體上誘導出長度≥0.5cm且個數≥5個的不定芽才結束培養，此步驟2)結束后所得物命名為白花前胡無菌苗；

此步驟2)的培養時間約為4～6周；

3)、生根培養：

將步驟2)所得的白花前胡無菌苗上的每個長度≥0.5cm的不定芽分別進行切割，得單芽；

將單芽轉接到生根培養基中，在植物組織培養室內培養，培養溫度24±1℃，直至獲得根數≥5根且株高≥3.0cm的生根后白花前胡無菌組培苗；

此步驟3)的總培養時間約為30天左右；在生根培養基中培養15d后就出現生根現象；

4)、組培苗馴化移栽：

將步驟3)所得的生根后白花前胡無菌組培苗放入水培瓶內進行水培養，培養溫度為24±1℃，水培瓶做遮光處理(避免綠藻生長)；直至當培養至株高≥15cm且根長≥10cm的根至少有5根時，結束此步驟。

說明：結束此步驟后，可進行后續的常規基質栽培。

作為本發明的白花前胡不定芽的繁殖方法的改進，擴繁培養基為：MS+2.4～2.6mg6-BA、20～30g白砂糖、4～9g瓊脂，pH?5.8±0.2。