[發明專利]一種綿羊DQB基因的1號外顯子的擴增引物對、sg序列和應用在審
| 申請號： | 202211210723.5 | 申請日： | 2022-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN116064506A | 公開（公告）日： | 2023-05-05 |
| 發明（設計）人： | 許橋;陳燕;劉秋月;王海濤;馬潤林 | 申請（專利權）人： | 中國科學院遺傳與發育生物學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12N15/12;C12N15/10;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/64 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 蘇士瑩 |
| 地址： | 100020 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 綿羊 dqb 基因 號外 擴增 引物 sg 序列 應用 | ||
1.一種綿羊DQB基因的1號外顯子的擴增引物對，其特征在于，包括DQBF1和DQBR1，其中DQBF1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，DQBR1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
2.利用權利要求1所述擴增引物對擴增綿羊DQB基因的1號外顯子的方法，其特征在于，包括以下步驟，以綿羊基因組DNA為模板，與權利要求1所述擴增引物對配制PCR擴增體系，進行PCR擴增，得到所述綿羊DQB基因的1號外顯子；
所述PCR擴增的程序，包括：95℃預變性5min；95℃變性30s，59.5℃退火30s，72℃延伸45s，34循環；72℃再延伸5min。
3.根據權利要求2所述方法，其特征在于，所述PCR擴增體系以25μL計，包括DQBF11μL、DQBR11μL、DNA模板1μL、2×Mix?12.5μL和余量的H2O。
4.以權利要求2或3所述方法擴增得到的綿羊DQB基因的1號外顯子為靶基因設計的sg序列。
5.根據權利要求5所述sg序列，其特征在于，所述sg序列包括兩對單鏈寡核苷酸序列：DQBsg1-F和DQBsg1-R，及DQBsg2-F和DQBsg2-R；
其中DQBsg1-F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，DQBsg1-R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.4所示，DQBsg2-F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，DQBsg2-R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.6所示。
6.一種包含權利要求4或5所述sg序列的重組載體。
7.權利要求6所述重組載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：將sg序列的兩對單鏈寡核苷酸序列分別退火，然后連接到線性化的基礎載體上，得所述重組載體。
8.根據權利要求7所述構建方法，其特征在于，所述退火的程序包括95℃預變性5min，37℃退火10min。
9.權利要求4或5所述sg序列或權利要求6所述重組載體在對綿羊基因組中DQB基因1號外顯子區進行基因編輯中的應用。
10.一種對綿羊基因組中DQB基因1號外顯子區進行基因編輯的體系，其特征在于，包括權利要求6所述重組載體和綿羊體細胞。
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