[發明專利]一種檢測猴痘病毒的試劑及其應用

在審

• 申請號: 202211197813.5
• 申請日: 2022-09-29
• 公開（公告）號: CN116287431A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 袁靜;薛冠華;馮俊霞;崔曉虎;杜冰;馮燕玲;崔晶花;閆超;趙漢青;甘霖;范政
• 申請（專利權）人: 首都兒科研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12N15/11;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;張德斌

1.一種檢測猴痘病毒的試劑，該試劑包括：

針對猴痘病毒A27L基因的RAA檢測引物組；和/或

針對猴痘病毒F3L基因的RAA檢測引物組。

2.根據權利要求1所述的試劑，其中，所述A27L基因包括如SEQ?ID?NO:1所示的序列；

所述F3L基因包括如SEQ?ID?NO:8所示的序列。

3.根據權利要求1或2所述的試劑，其中，所述針對猴痘病毒A27L基因的RAA檢測引物組包括如SEQ?ID?NO.2所示序列的引物和如SEQ?ID?NO.3所示序列的引物：

5’-TCAGCGATTCCTATAGCCGTTCTTGTATTTGTG-3’(SEQ?ID?NO.2)；

5’-GTCTAAGCCTATTACTAATACTGGTATTGA-3’(SEQ?ID?NO.3)。

4.根據權利要求1-3任一項所述的試劑，其中，所述試劑還包括針對猴痘病毒A27L基因的探針，所述探針包括如SEQ?ID?NO.4所示序列的探針：

5’-CTAATGGATTGTATGGCTTGATAGCATCATCTTTATCATTATTAGGTGG-3’(SEQ?ID?NO.4)；

優選地，所述探針還包括在SEQ?ID?NO.4所示序列基礎上經修飾的探針。

5.根據權利要求4所述的試劑，其中，所述修飾包括：探針序列5’端堿基采用熒光報告基團修飾，同時探針序列3’端堿基采用熒光淬滅基團修飾；

優選地，所述修飾包括：探針序列離5’端堿基數32bp的位置上的堿基T采用熒光報告基團FAM修飾，探針序列離5’端堿基數34bp的位置上的堿基T用熒光淬滅基團BHQ修飾，探針序列離5’端堿基數33bp的位置上的堿基T用四氫呋喃殘基(THF)替換。

6.根據權利要求1-5任一項所述的試劑，其中，所述針對猴痘病毒F3L基因的RAA檢測引物組包括如SEQ?ID?NO.5所示序列的引物和如SEQ?ID?NO.6所示序列的引物：

5’-GACATAACTAAGAAGTTTATCTACAGCCAATTTAGC-3’(SEQ?ID?NO.5)；

5’-GAATCAGTGGGGCCTAGTAACTCTCCTACA-3’(SEQ?ID?NO.6)。

7.根據權利要求1-6任一項所述的試劑，其中，所述試劑還包括針對猴痘病毒F3L基因的探針，所述探針包括如SEQ?ID?NO.7所示序列的探針：

5’-TAGCATCTCGTTTAGATTTTCCATCTGCCTTATCGAATACTCTTCCGT-3’(SEQ?ID?NO.7)；

優選地，所述探針還包括在SEQ?ID?NO.7所示序列基礎上經修飾的探針。

8.根據權利要求7所述的試劑，其中，所述修飾包括：探針序列5’端堿基采用熒光報告基團修飾，同時探針序列3’端堿基采用熒光淬滅基團修飾；

優選地，所述修飾包括：探針序列離5’端堿基數31bp的位置上的堿基T采用熒光報告基團FAM修飾，探針序列離5’端堿基數33bp的位置上的堿基T用熒光淬滅基團BHQ修飾，探針序列離5’端堿基數32bp的位置上的堿基A用四氫呋喃殘基(THF)替換。

9.一種用于檢測猴痘病毒的試劑盒，其包含權利要求1-8任一項所述的試劑。

10.根據權利要求9所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括RAA基礎熒光通用反應試劑和反應緩沖液；

優選地，所述緩沖液包括Tris-HCl緩沖液、MgAc和PEG10000。

11.根據權利要求9或10所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括陽性質控品和陰性質控品；

優選地，所述陽性質控品包括含猴痘病毒特異性基因序列的質粒模板，所述陰性質控品包括不含猴痘病毒特異性序列的質粒模板。