[發明專利]一種非特異性凝集抑制因子去除試劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202211193107.3
• 申請日: 2022-09-28
• 公開（公告）號: CN115598357A
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 徐靜;向軍;邱文英;李敏;孔雪英;龔文波;邢剛;曾紅梅
• 申請（專利權）人: 華派生物工程集團有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 成都正德明志知識產權代理有限公司 51360
• 代理人: 楊木梅

本發明公開了一種非特異性凝集抑制因子去除試劑及其制備方法。該方法包括以下步驟：(1)將高嶺土和蒙脫石粉分別加入至酸液中，混合均勻后靜置，并去除上清；(2)再向步驟(1)所得產物中加入與步驟(1)所用量相同的酸液，混合均勻后靜置，并去除上清；(3)向步驟(2)所得產物中加入緩沖液，然后高壓滅菌；(4)待滅菌產物冷卻至2～8℃后，加入胰蛋白酶溶液即可。本發明以高嶺土、蒙脫石粉、豬源胰蛋白酶三種成分復配，制備了非特異性凝集因子因子去除試劑，可有效去除血清中非特異性凝集抑制因子。用該非特異性凝集抑制因子去除試劑處理血清后，處理后的血清的血凝抑制抗體效價與受體阻斷酶處理的血清血凝抑制抗體效價相當。

技術領域

本發明屬于診斷用深惡制品技術領域，具體涉及一種非特異性凝集抑制因子去除試劑及其制備方法。

背景技術

血凝抑制試驗(HI)是判斷多種病毒(如豬流感病毒、新城疫病毒、豬細小病毒)感染情況及檢測抗體水平最常用的血清學方法。多種動物(豬、豚鼠、雞、家兔)血清中存在非特異性凝集因子和非特異性凝集抑制因子，這兩類因子如果不去除，會造成HI結果偏差，出現假陰性(抗體效價偏低)或假陽性(抗體效價偏高)。在HI試驗前，需要對某些動物血清進行處理。

常用的非特異性凝集抑制因子去除試劑為25％高嶺土。但按照常規方法使用的高嶺土，不能有效去除血凝抑制試驗中非特異性凝集抑制因子或去除血凝抑制試驗中非特異性凝集抑制因子所導致的不穩定，造成HI抗體效價偏高或HI效價不穩定。

由于對非特異性凝集抑制因子了解不斷深入，發現受體阻斷酶能有效去除血清的的非特異性凝集抑制因子。但由于受體阻斷酶成本較高，需要開發一種價格便宜的非特異性凝集抑制因子去除試劑。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供一種非特異性凝集抑制因子去除試劑及其制備方法，能在保證HI抗體效價不受影響的同時，保證結果的穩定性。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種非特異性凝集抑制因子去除試劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)將高嶺土和蒙脫石粉分別加入至酸液中，混合均勻后靜置，并去除上清；所述高嶺土在酸液中的終濃度為0.01～0.1g/mL，蒙脫石粉在酸液中的終濃度為0.01～0.1g/mL；

(2)再向步驟(1)所得產物中加入與步驟(1)所用量相同的酸液，混合均勻后靜置，并去除上清；重復上述過程2～3次；

(3)向步驟(2)所得產物中加入緩沖液，并調節其pH值為7～9，然后于100～130℃高壓滅菌30～50min；

(4)待滅菌產物冷卻至2～8℃后，加入胰蛋白酶溶液，于2～8℃攪拌30～60min即可。

本發明的技術原理如下：

蒙脫石粉具有較強的離子交換能力、吸附性、吸水后其體積膨脹可成膠體狀；高嶺土具有較弱的離子交換能力、具有較好的吸附性、在水中具有懸浮性和分散性。并從豬的胰臟中提取了一種胰蛋白酶-絲氨酸蛋白水解酶，它能將受體多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切斷，從而阻斷受體在血凝抑制中發揮作用。

本發明利用蒙脫石粉與高嶺土離子交換能力的互補性、雙重吸附性能、蒙脫石粉的成膠性和高嶺土的懸浮性，胰蛋白酶可切斷受體中的賴氨酸和精氨酸的羧基的特性，配合制成了該非特異性凝集抑制因子去除試劑。

進一步地，酸液為稀鹽酸，其濃度為1～3mol/L。

進一步地，酸液中高嶺土的終濃度為0.03g/mL，蒙脫石粉的終濃度為0.02g/mL。

進一步地，緩沖液為PBS緩沖液，其包括以下終濃度的組分：