[發(fā)明專利]含不同截短PstS1融合蛋白AP的新型結(jié)核病亞單位疫苗的制備和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211192711.4
• 申請(qǐng)日: 2022-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116082520A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李浩;曾令媛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;A61K39/04;A61P31/06
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 顧鮮紅

本發(fā)明提供了一種含PstS1片段和Ag85A片段的融合蛋白和結(jié)核病亞單位疫苗。融合蛋白包括：第一肽段，所述第一肽段包含Ag85A片段；第二肽段，所述第二肽段包括PstS1片段，所述第一肽段與所述第二肽段相連；亞單位疫苗包括上述的融合蛋白。本發(fā)明的融合蛋白可同時(shí)激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫與體液免疫，提高機(jī)體殺傷結(jié)核分枝桿菌的能力，該亞單位疫苗可有效的預(yù)防結(jié)核病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種含不同截短PstS1融合蛋白AP的新型結(jié)核病亞單位疫苗的制備和應(yīng)用，更具體地，本發(fā)明涉及一種融合蛋白、核酸分子、表達(dá)載體、重組細(xì)胞和亞單位疫苗及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium?tuberculosis，Mtb)引起的一種危害極大的慢性消耗性傳染病，每年有900多萬(wàn)新發(fā)病例，死亡人數(shù)約140萬(wàn)。隨著耐藥結(jié)核分枝桿菌和艾滋病毒-結(jié)核分枝桿菌(HIV-TB)合并感染的出現(xiàn)，這一情況變得更加復(fù)雜，使得結(jié)核病的預(yù)后和治療情況更加惡化。牛結(jié)核病(Bovine?Tuberculosis)是由牛分枝桿菌(Mycobacterium?bovis，M.bovis)引起的一種人獸共患的慢性傳染病，以組織器官的結(jié)核結(jié)節(jié)性肉芽腫和干酪樣、鈣化的壞死病灶為特征。其中以奶牛多發(fā)，嚴(yán)重影響了畜牧業(yè)的發(fā)展以及人類健康。

卡介苗(BCG)作為WHO目前唯一批準(zhǔn)的預(yù)防結(jié)核病的疫苗，對(duì)嬰兒及青少年具有保護(hù)作用，但是對(duì)成年人的保護(hù)作用并不明確，因此，亟需開(kāi)發(fā)一種有效的結(jié)核疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題至少之一。為此，本發(fā)明提供了一種含PstS1片段和Ag85A片段的結(jié)核病亞單位疫苗，該亞單位疫苗可同時(shí)激發(fā)并提高細(xì)胞免疫與體液免疫，對(duì)結(jié)核病具有很好的預(yù)防效果。

本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：

目前針對(duì)結(jié)核病的疫苗有很多種，正在開(kāi)發(fā)的新型結(jié)核疫苗包括重組BCG(rBCG)疫苗、減毒M.tb疫苗、佐劑亞單位蛋白疫苗、病毒載體疫苗、全細(xì)胞疫苗、DNA疫苗、RNA疫苗等。

亞單位疫苗由于其易于生產(chǎn)、安全性好、特異性強(qiáng)、質(zhì)量控制好等特點(diǎn)逐漸進(jìn)入人們的視野。在有關(guān)重組亞單位疫苗抗原的篩選中，更傾向于選擇能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫的抗原，但是研究證明多種細(xì)胞抗原的堆積對(duì)其免疫保護(hù)效果的提高并不明顯。

基于此，發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)對(duì)重組亞單位疫苗抗原進(jìn)行篩選，最終確定了Ag85A和磷酸鹽特異性轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)蛋白1(Phosphate?transport?system?protein?l，PstS1)兩種蛋白。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，Ag85A是M.tb培養(yǎng)濾液蛋白的主要構(gòu)成成分，也是M.tb的T細(xì)胞抗原，能夠誘導(dǎo)極強(qiáng)的Th1型免疫應(yīng)答，對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)感染很重要；PstS1是結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁的重要蛋白，具有免疫原性，能刺激B細(xì)胞和T細(xì)胞的增殖，是一種重要的免疫保護(hù)性抗原。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，選擇上述兩種蛋白制得的融合蛋白，可同時(shí)激發(fā)細(xì)胞免疫與體液免疫，提高機(jī)體殺傷結(jié)核分枝桿菌的能力。發(fā)明人將上述的融合蛋白與佐劑制成結(jié)核病亞單位疫苗，并將其注射到小鼠體內(nèi)，然后采用結(jié)核分枝桿菌對(duì)小鼠進(jìn)行攻菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠臟器中的結(jié)核分枝桿菌載量顯著降低，幾乎達(dá)到了與BCG相同的免疫保護(hù)力，說(shuō)明該結(jié)核病亞單位疫苗可極大地提高機(jī)體抵抗結(jié)核分枝桿菌的能力，可有效預(yù)防和治療結(jié)核病。并且，發(fā)明人經(jīng)過(guò)試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，結(jié)核病亞單位疫苗可有效地加強(qiáng)BCG的免疫效應(yīng)。

在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種融合蛋白。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述融合蛋白包括：第一肽段，所述第一肽段包含Ag85A片段；第二肽段，所述第二肽段包括PstS1片段，所述第一肽段與所述第二肽段相連。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的融合蛋白可同時(shí)激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫與體液免疫，提高機(jī)體殺傷結(jié)核分枝桿菌的能力。

在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了一種核酸分子。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述核酸分子編碼前述的融合蛋白。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的核酸分子可有效地表達(dá)前述的融合蛋白。